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Metadados | Descrição | Idioma |
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Autor(es): dc.contributor | Neves, Felipe Piedade Gonçalves | - |
Autor(es): dc.contributor | http://lattes.cnpq.br/5289973921789746 | - |
Autor(es): dc.contributor | Barbosa, André Victor | - |
Autor(es): dc.contributor | Oliveira, Laura Maria Andrade de | - |
Autor(es): dc.contributor | http://lattes.cnpq.br/2903334525852908 | - |
Autor(es): dc.creator | Cabral, Amanda Seabra | - |
Data de aceite: dc.date.accessioned | 2025-01-03T11:41:51Z | - |
Data de disponibilização: dc.date.available | 2025-01-03T11:41:51Z | - |
Data de envio: dc.date.issued | 2024-11-10 | - |
Data de envio: dc.date.issued | 2024-11-10 | - |
Fonte completa do material: dc.identifier | https://app.uff.br/riuff/handle/1/35302 | - |
Fonte: dc.identifier.uri | http://educapes.capes.gov.br/handle/capes/920026 | - |
Descrição: dc.description | As bactérias do gênero Enterococcus são membros da microbiota normal do trato gastrointestinal humano e estão comumente relacionadas a infecções relacionadas à assistência à saúde, sobretudo no ambiente hospitalar. A partir da pressão seletiva causada pelo extensivo uso de antimicrobianos pela população, vem ocorrendo um aumento na frequência de resistência a diversos antimicrobianos pelas espécies enterocócicas, como ocorreu com o glicopeptídeo vancomicina, importante no tratamento das doenças relacionadas ao microrganismo. A emergência de fenótipos VRE (Enterococcus resistentes à vancomicina) se dá pela presença de operons, como vanA e vanB, que tornam o uso da droga ineficaz. O sistema CRISPR-Cas, um importante mecanismo de defesa bacteriano contra elementos genéticos móveis invasores, tem sido cada vez mais utilizado como um mecanismo de edição gênica, podendo ser utilizado como uma forma de reconhecer e inativar genes de interesse. Assim, o presente estudo objetiva publicar uma revisão de literatura sobre CRISPR e enterococos, considerando sua ocorrência, estrutura e organização, mecanismos de ação e uso como tecnologia de engenharia genética, além de realizar edição gênica de cepas VRE utilizando a ferramente CRISPR. A partir da leitura e análise dos artigos foi encontrada uma maior prevalência de CRISPR2 (1.190; 60,1%) em enterococos. E. faecalis foi a espécie que apresentou maior ocorrência de CRISPR em seu genoma, com 3.041 elementos CRISPR em 3.195 amostras. Os sistemas CRISPR apresentavam de 1 a 20 espaçadores com tamanho entre 23 e 37 pb e sequências de repetição de 25 a 37 pb. O principal uso da ferramenta de edição foi pelo sistema de interferência CRISPRi realizando knockout de genes-alvo, com a entrega do sistema por meio de plasmídeos. Na segunda parte do projeto, foi realizada a edição gênica de cepas VRE para que se possa verificar a possibilidade de reversão da resistência. Para tal, foram utilizadas 3 amostras clínicas de VRE de Enterococcus faecalis e um controle para o gene vanA para serem testadas com a ferramenta desenhada para reconhecer e inativar os operons vanA, entregue por meio de transformação a partir de eletroporação. Após as técnicas de PCR, sequenciamento e replica plating para confirmação da edição, foi observado que não houve edição do gene vanA. Contudo, estão sendo realizados ajustes no protocolo com resultados preliminares promissores | - |
Descrição: dc.description | Enterococcus spp. are members of the normal microbiota of the human gastrointestinal tract and are commonly related to healthcare-associated infections, especially in the hospital environment. The selective pressure caused by the extensive use of antimicrobial agents increased the frequency of resistance in enterococcal species to various drugs, as occurred with the glycopeptide vancomycin, important in the treatment of diseases related to the microorganism. The emergence of VRE (vancomycin-resistant Enterococcus) occurs due to the presence of operons, such as vanA and vanB. The CRISPR-Cas system, an important bacterial defense mechanism against the entry of mobile genetic elements, has been increasingly used as a gene editing tool, which can be used as a way to recognize and inactivate genes of interest. Thus, the present study aims to publish a literature review on CRISPR and enterococci, considering their occurrence, structure and organization, mechanisms of action, and use as a genetic engineering technology, and to perform gene editing of VRE strains using the CRISPR tool. By doing this review, we found a higher prevalence of CRISPR2 (1,190; 60.1%) was found. E. faecalis was the species with the highest occurrence of CRISPR in its genome [3,041 CRISPR elements in 3,195 isolates]. CRISPR systems had 1 to 20 spacers, with size between 23 and 37 bp and direct repeat (DR) sequences from 25 to 37 bp. The main use of the editing tool was by the CRISPRi interference system, performing knockout of target genes, and the delivery system was done with plasmids. In the second part of the project, this system was used for gene editing of VRE strains in order to verify the possibility of resistance reversal. Therefore, 3 samples of VRE from Enterococcus faecalis and a control for vanA gene were used to test the tool designed to recognize and inactivate vanA operons, delivered through electroporation. After PCR, sequencing and replica plating techniques to confirm the edition, it was confirmed that the edition of the vanA gene was not possible to be performed. However, adjustments are being made to the protocol with promising preliminary results | - |
Descrição: dc.description | 63 f. | - |
Formato: dc.format | application/pdf | - |
Idioma: dc.language | pt_BR | - |
Direitos: dc.rights | Open Access | - |
Direitos: dc.rights | CC-BY-SA | - |
Palavras-chave: dc.subject | Enterococcus spp. | - |
Palavras-chave: dc.subject | Resistência a antimicrobianos | - |
Palavras-chave: dc.subject | VRE | - |
Palavras-chave: dc.subject | CRISPR- Cas9 | - |
Palavras-chave: dc.subject | Enterococcus | - |
Palavras-chave: dc.subject | Resistência microbiana a medicamentos | - |
Palavras-chave: dc.subject | Enterococos resistentes à vancomicina | - |
Palavras-chave: dc.subject | Proteína 9 associada à CRISPR | - |
Palavras-chave: dc.subject | Enterococcus spp. | - |
Palavras-chave: dc.subject | Antimicrobial resistance | - |
Palavras-chave: dc.subject | VRE | - |
Palavras-chave: dc.subject | CRISPR-Cas9 | - |
Título: dc.title | Enterococos e CRISPR: revisão de literatura e edição gênica de cepas multirresistentes | - |
Tipo de arquivo: dc.type | Dissertação | - |
Aparece nas coleções: | Repositório Institucional da Universidade Federal Fluminense - RiUFF |
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