Análise da liofilização como novo método de isolamento de vesículas extracelulares da saliva.

Registro completo de metadados
MetadadosDescriçãoIdioma
Autor(es): dc.contributorCasado, Priscila Ladeira-
Autor(es): dc.contributorhttp://lattes.cnpq.br/5162476793291873-
Autor(es): dc.contributorCarvalho, Patricia Arriaga-
Autor(es): dc.contributorhttp://lattes.cnpq.br/4192123935018501-
Autor(es): dc.contributorMontenegro, Alexandre Campos-
Autor(es): dc.contributorhttp://lattes.cnpq.br/2759364304982879-
Autor(es): dc.contributorAguiar, Telma Regina da Silva-
Autor(es): dc.contributorhttp://lattes.cnpq.br/4968871978860193-
Autor(es): dc.contributorNunes, Carlos Henrique Ramirez-
Autor(es): dc.contributorhttp://lattes.cnpq.br/5542471581795672-
Autor(es): dc.contributorhttp://lattes.cnpq.br/6556355859165674-
Autor(es): dc.creatorSantos, Thalita Alves Barreto-
Data de aceite: dc.date.accessioned2025-01-03T11:38:55Z-
Data de disponibilização: dc.date.available2025-01-03T11:38:55Z-
Data de envio: dc.date.issued2024-11-07-
Data de envio: dc.date.issued2024-11-07-
Fonte completa do material: dc.identifierhttps://app.uff.br/riuff/handle/1/35281-
Fonte: dc.identifier.urihttp://educapes.capes.gov.br/handle/capes/919147-
Descrição: dc.descriptionAs vesículas extracelulares (VEs) parecem ser um potencial biomarcador porque são mensuráveis antes ou durante a manifestação clínica de inúmeras doenças e alvos terapêuticos. Nosso objetivo foi examinar quão eficaz é o processo de liofilização para a maior recuperação de microRNAs de amostras de saliva. Amostras de saliva foram coletadas por meio de enxágue bucal com solução 0,9% soro fisiológico. Cinco protocolos para preparo de amostras foram realizados antes ou depois da liofilização. O RNA total foi isolado por Trizol, seguido de segunda purificação (Optimization Protocolo). As VEs foram analisados por microscopia eletrônica para localização CD63/CD9, análise de membrana, dot blotting e dispersão de luz quase elástica (QELS). A reação de transcrição foi realizada utilizando o kit de transcrição reversa TaqMan® MicroRNA. PCR quantitativo em tempo real (qRT-PCR) foi realizado para analisar miRNAs liofilizado e ultracentrifugado (Controle). A comparação entre a concentração de RNA total (ng/ml) em diferentes amostras, para protocolos de preparação do sobrenadante de saliva liofilizada, mostraram diferenças entre os grupos, p<0,0001. Porém, as amostras liofilizadas apresentaram relações 260/280 acima de 1,80(±0,15), mostrando alta pureza da amostra. A análise qRT-PCR demonstrou a presença de miR-16, miR-21, miR-33a e miR-146b nas amostras liofilizadas e ultracentrifugadas. A análise de microscopia eletrônica de VEs mostrou semelhanças em tamanho, distribuição de partículas e localização CD63/CD9 na membrana para liofilização e ultracentrifugação. Análise QELS dasVEs apresentaram tamanhos distintos (30 a 70 nm) e (300 a 370 nm) para ambos os métodos. Além disso, a análise do qRT-PCR demonstrou a amplificação de alguns microRNAs (mir-16, mir-21, mir-33a e mir-146b) no sobrenadante de saliva liofilizada e ultracentrifugada, caracterizando assim liofilização como um novo método de isolamento de vesículas extracelulares de biofluidos.-
Descrição: dc.descriptionExtracellular vesicles (EVs) appear to be a potential biomarker because they are measurable before or during the clinical manifestation of numerous diseases and therapeutic targets. We aimed to examine how effective the lyophilization process is for the higher recovery of microRNAs from saliva samples. Saliva samples were collected by rinsing the mouth with 0.9% physiological saline. Five protocols for sample preparation were performed before or after lyophilization. The total RNA was isolated by Trizol, followed by second purification (Optimization Protocol). The EVs were analyzed by Electron microscopy to CD63/CD9 localization on EV membrane, dot blotting and quasi- elastic light scattering (QELS) analysis. The Reverse Transcription reaction was performed using the TaqMan® MicroRNA Reverse Transcription Kit. qRT-PCR was performed to analyze miRNAs in the lyophilized and ultracentrifuged (Control) samples. The comparison between Total RNA concentration (ng/ml) on different sample preparation protocols for the lyophilized saliva supernatant showed differences between the groups, p&lt;0.0001. However, samples lyophilized presented 260/280 ratios above 1.80(±0.15) and showed high sample purity. The qRT-PCR analysis demonstrated the presence of miR-16, miR- 21, miR-33a, and miR-146b in the freeze-drying and ultracentrifuged samples. Electron microscopy analysis of EVs showed similarities in size, particle distribution, and CD63/CD9 localization on EV membrane for lyophilization and ultracentrifugation. QELS analysis of the EVs showed distinct sizes (30 to 70 nm) and (300 to 370 nm) for both methods. Also, the qRT- PCR analysis demonstrated the amplification of some microRNAs (mir-16, mir-21, mir-33a, and mir-146b) in the lyophilized and ultracentrifuged saliva supernatant, thus characterizing lyophilization as a new method of biofluids extracellular vesicles isolation.-
Descrição: dc.description43 f.-
Formato: dc.formatapplication/pdf-
Idioma: dc.languagept_BR-
Direitos: dc.rightsOpen Access-
Direitos: dc.rightsCC-BY-SA-
Palavras-chave: dc.subjectMicroRNA-
Palavras-chave: dc.subjectVesículas extracelulares-
Palavras-chave: dc.subjectExossomos-
Palavras-chave: dc.subjectSaliva-
Palavras-chave: dc.subjectLiofilização-
Palavras-chave: dc.subjectVesículas extracelulares-
Palavras-chave: dc.subjectSaliva-
Palavras-chave: dc.subjectExossomos-
Palavras-chave: dc.subjectMicroRNAs-
Palavras-chave: dc.subjectLiofilização-
Palavras-chave: dc.subjectMicroRNA-
Palavras-chave: dc.subjectExtracellular vesicles-
Palavras-chave: dc.subjectExosomes-
Palavras-chave: dc.subjectSaliva-
Palavras-chave: dc.subjectLyophilization-
Título: dc.titleAnálise da liofilização como novo método de isolamento de vesículas extracelulares da saliva.-
Título: dc.titleAnalysis of freeze-drying as a new method for isolating extracellular vesicles from saliva.-
Tipo de arquivo: dc.typeDissertação-
Aparece nas coleções:Repositório Institucional da Universidade Federal Fluminense - RiUFF

Não existem arquivos associados a este item.