Avaliação do congelamento como método de conservação de medula óssea para o diagnóstico molecular de Leishmaniose visceral humana

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MetadadosDescriçãoIdioma
Autor(es): dc.contributorMello, Cíntia Xavier de-
Autor(es): dc.contributorhttp://lattes.cnpq.br/9386309682231253-
Autor(es): dc.contributorSouto Maior, Claudia Maria Antunes Uchôa-
Autor(es): dc.contributorLima, Caio Thomaz de Silva e-
Autor(es): dc.contributorSantos, Isabela Cordeiro da Silva-
Autor(es): dc.contributorhttp://lattes.cnpq.br/1709499922841661-
Autor(es): dc.creatorRodrigues, Lara Mírian Santos-
Data de aceite: dc.date.accessioned2025-01-03T11:34:44Z-
Data de disponibilização: dc.date.available2025-01-03T11:34:44Z-
Data de envio: dc.date.issued2024-12-11-
Data de envio: dc.date.issued2024-12-11-
Fonte completa do material: dc.identifierhttps://app.uff.br/riuff/handle/1/35774-
Fonte: dc.identifier.urihttp://educapes.capes.gov.br/handle/capes/918705-
Descrição: dc.descriptionO complexo das leishmanioses são doenças causadas por parasitos do gênero Leishmania e figura entre as principais doenças negligenciadas de acordo com a Organização Mundial da Saúde. A Leishmaniose Visceral Humana (LVH) se apresenta como a forma grave da doença, potencialmente fatal, quando não realizado o tratamento adequado, e com um diagnóstico desafiador. Neste contexto, definir um protocolo operacional padrão validado e confiável envolvendo todas as etapas do diagnóstico é uma abordagem importante e necessária para auxiliar profissionais no diagnóstico da LVH. O espécime clínico de eleição utilizado no diagnóstico molecular são aspirados de medula óssea (MO). Atualmente, não se tem definido com embasamentos científicos qual o melhor método de conservação e por quanto tempo podem ser mantidas. Este estudo tem como objetivo avaliar o congelamento a -20°C como técnica de conservação de amostras de MO para diagnóstico de LVH. Como comparativo, utilizamos as amostras que são enviadas ao laboratório para diagnóstico (a fresco). Foram utilizadas 20 amostras congeladas por mais de 2 anos, até 8 meses e com 15 dias. O DNA foi extraído e para avaliar a diferença na quantificação do DNA de amostras congeladas e a fresco, foi utilizada a PCR quantitativa (qPCR). O DNA foi também quantificado e avaliado sua integridade por Qubit®, NanoDrop® e gel de agarose 1%. A quantificação de DNA das amostras foi realizada pela qPCR utilizando o sistema PowerUp SYBR-Green com primers direcionados ao gen 18s e ao minicírculo do kDNA de Leishmania infantum. Também foram utilizados como controle endógeno primers direcionados aos genes humanos β-actina e albumina. Além disso, o índice de degradação de ambos os acondicionamentos foi calculado. Das 20 amostras, 6 eram positivas, destas 1 congelada não foi possível detectar kDNA parasitário. A carga parasitária foi semelhante em ambos os alvos (kDNA e 18S) e sem diferença estatística. O índice de degradação das amostras congeladas quando comparadas com as a fresco foi maior, provocado pela diminuição na concentração da albumina, entretanto não foi encontrada diferença estatística. No gel de agarose foi possível confirmar esta degradação, representado por um arraste. Portanto, os resultados sugerem a possibilidade de utilizar o congelamento a -20°C por até 15 dias como método de conservação de MO, entretanto, torna-se necessário outros estudos, principalmente com um número de amostras maior e definir o período máximo de viabilidade de uma amostras congelada-
Descrição: dc.descriptionThe leishmaniasis complex are diseases caused by parasites of the genus Leishmania and are among the main neglected diseases according to the World Health Organization. Human Visceral Leishmaniasis (LVH) presents itself as the severe form of the disease, potentially fatal when treatment is not carried out appropriate treatment and a requested diagnosis. In this context, defining a validated and reliable standard operating protocol involved in all stages of diagnosis is an important and necessary approach to assist professionals in diagnosing LVH. The clinical specimen of selection used in molecular diagnosis are bone marrow (BM) aspirates. Currently, it is not scientifically defined what is the best conservation method and how long they can be conditioned. This study aims to evaluate freezing at -20°C as a method of preserving BM samples for the diagnosis of LVH. As a comparison, we use samples that are sent to the laboratory for diagnosis (fresh). 20 samples frozen for more than 2 years, up to 8 months and 15 days were used. DNA was extracted and to evaluate the difference in DNA quantification from frozen and fresh samples, quantitative PCR (qPCR) was used. The DNA was also quantified and its integrity assessed using Qubit®, NanoDrop® and 1% agarose gel. Sample quantification was carried out by qPCR using the PowerUp SYBR-Green system with primers targeting the gen 18s and the Leishmania infantum kDNA minicircle, which were also used as a endogenous control primers targeting the human β-actin and albumin genes. Furthermore, the manipulation index for both conditionings was calculated. Of the 20 samples, 6 were positive, of which 1 was frozen and it was not possible to detect parasitic kDNA. The parasite load was similar in both targets (kDNA and 18S) and without statistical difference. The degradation index (DI) of frozen samples was higher, caused by the decrease in albumin concentration, however no statistical difference was found. It was possible to confirm the degradation in the agarose gel, represented by a drag. Therefore, the results suggest the possibility of using freezing at -20°C for 15 days as a method of OM conservation, however, other studies are necessary, especially with a larger number of samples and defining the maximum period of viability from a frozen sample-
Descrição: dc.description58 f.-
Formato: dc.formatapplication/pdf-
Idioma: dc.languagept_BR-
Direitos: dc.rightsOpen Access-
Direitos: dc.rightsCC-BY-SA-
Palavras-chave: dc.subjectLeishmaniose-
Palavras-chave: dc.subjectDiagnóstico-
Palavras-chave: dc.subjectLeishmaniose visceral humana-
Palavras-chave: dc.subjectLeishmania infantum-
Palavras-chave: dc.subjectLeishmaniose-
Palavras-chave: dc.subjectLeishmaniose visceral-
Palavras-chave: dc.subjectLeishmania infantum-
Palavras-chave: dc.subjectTécnicas de diagnóstico molecular-
Palavras-chave: dc.subjectLeishmaniasis-
Palavras-chave: dc.subjectDiagnosis-
Palavras-chave: dc.subjectHuman visceral leishmaniasis-
Palavras-chave: dc.subjectLeishmania infantum-
Título: dc.titleAvaliação do congelamento como método de conservação de medula óssea para o diagnóstico molecular de Leishmaniose visceral humana-
Tipo de arquivo: dc.typeTrabalho de conclusão de curso-
Aparece nas coleções:Repositório Institucional da Universidade Federal Fluminense - RiUFF

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