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Influência do Atazanavir nas vias inflamatórias em neuroblastos infectados ou não pelo vírus Zika

Use este link compartilhar ou citar este material: http://educapes.capes.gov.br/handle/capes/898498
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MetadadosDescriçãoIdioma
Autor(es): dc.contributorJunqueira, Maria Imaculada Muniz Barboza-
Autor(es): dc.contributorBorges, Tatiana Karla dos Santos-
Autor(es): dc.creatorCorazza, Danilo-
Data de aceite: dc.date.accessioned2024-10-23T16:02:51Z-
Data de disponibilização: dc.date.available2024-10-23T16:02:51Z-
Data de envio: dc.date.issued2021-08-13-
Data de envio: dc.date.issued2021-08-13-
Data de envio: dc.date.issued2021-08-13-
Data de envio: dc.date.issued2021-02-26-
Fonte completa do material: dc.identifierhttps://repositorio.unb.br/handle/10482/41684-
Fonte: dc.identifier.urihttp://educapes.capes.gov.br/handle/capes/898498-
Descrição: dc.descriptionTese (doutorado) — Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Medicina Tropical, 2021.-
Descrição: dc.descriptionMesmo sendo relativamente novo, o vírus Zika descoberto em 1947 foi protagonista de diversos surtos, dentre eles o do Brasil (2015) com grande impacto onde foi identificado, causando microcefalia e desordens neurológicas que chamaram a atenção para a sua patogenia. Drogas antirretrovirais como o atazanavir, que são inibidores de protease, possuem atividade contra o vírus Zika, entretanto, pouco se sabe sobre sua ação em neuroblastos infectados ou não, e se são capazes de modificar vias imunológicas que culminem em inflamação. O objetivo deste trabalho foi avaliar a influência do atazanavir na viabilidade e na produção de radicais livres e na produção de citocinas por linhagens de neuroblastos infectados pelo vírus Zika. A melhor compreensão desses efeitos poderá contribuir para acrescentar novas medidas terapêuticas para diminuir a morbidade da infecção pelo vírus Zika. Para o estudo utilizou-se duas titulações (MOI 0,1 e 1) da isolado do vírus Zika PE/243, duas concentrações do medicamento atazanavir (1 e 3 μM) e neuroblastos SK-N-BE (2). Para avaliar a viabilidade celular utilizou-se o método de redução do MTT por espectofotometria e por citometria de fluxo avaliou-se a expressão da caspase-3 por teste antígeno-anticorpo, a morte celular por anexina/iodeto de propídio por citometria de fluxo, a produção de espécies reativas de oxigênio e nitrogênio pelas sondas DCF-DA e DAF-2DA, respectivamente, e a dosagem das citocinas IL-1, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12p70 e FNT por Kit CBA/BD. Nossos dados mostraram que: 1) a infecção pelo o vírus Zika reduziu a viabilidade dos neuroblastos e 1 μM de atazanavir reverteu parcialmente essa toxicidade 2) a infecção com 1 MOI do vírus Zika causou a morte por necrose e aumentou a expressão de caspase-3, no entanto, a incubação dos neuroblastos com 1 μM de atazanavir reduziu essa expressão; 3) tanto a inibição quanto a indução da via do NF-B afetaram a viabilidade dos neuroblastos, na presença ou ausência da infecção; 4) a inibição da autofagia causou a redução da viabilidade dos neuroblastos, sendo esta mais evidente na presença da infecção; 5) a infecção pelo vírus Zika inibiu a produção de EROs pelos neuroblastos, mas esta foi parcialmente revertida pelo atazanavir; 6) na presença da infecção 0,1 MOI do vírus reduziu a produção de ERNs e mesmo o atazanavir não foi capaz de reverter essa redução; 7) na presença de 1 MOI do vírus, houve aumento na produção de IL-1, FNT e mais expressiva de IL-6 e IL-8, enquanto houve redução de IL-12p70; 8) o inibidor da produção de ERNs diminuiu acentuadamente a viabilidade da célula, já indutores das EROs também reduziram a viabilidade dos neuroblastos. No conjunto, os resultados sugerem que o atazanavir na concentração 1 μM pode ser um medicamento promissor para proteger o neuroblasto na infecção pelo vírus Zika, contribuindo para diminuir o risco de microcefalia pela diminuição do risco de morte dos neuroblastos na vigência da infecção em gestantes. Entretanto, os é preciso dar continuidade aos estudos para verificar se a ação protetora do Atazanavir nos neuroblastos que observamos in vitro vai persistir em mulheres gestantes infectadas pelo vírus Zika, e se o tratamento poderia prevenir as malformações fetais.-
Descrição: dc.descriptionConselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) e Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES).-
Descrição: dc.descriptionEven though it is relatively new, the Zika virus discovered in 1947 was the protagonist of several outbreaks, among them, the one in Brazil (2015) with great impact, causing microcephaly and neurological disorders that drew attention to its pathogenesis. Antiretroviral drugs such as atazanavir, which are protease inhibitors, have activity against the Zika virus, however, little is known about their action on infected neuroblasts, and whether they are able to modify immune pathways that culminate in inflammation. The objective of this work was to evaluate the influence of atazanavir on viability and production of free radicals and cytokines by neuroblast in vitro. A better understanding of these effects may contribute to the addition of novel therapeutic to reduce the morbidity of Zika virus infection. Two titrations (MOI 0.1 and 1) of the Zika virus isolate PE/243 were used, two concentrations of the drug atazanavir (1 and 3 μM) and neuroblasts SK-N-BE (2). To evaluate cell viability, the MTT reduction method was used by spectrophotometry and by flow cytometry, the expression of caspase-3 was evaluated by antigen-antibody test, cell death by annexin/propidium iodide by flow cytometry, the production of reactive oxygen and nitrogen species by the probes DCF-DA and DAF-2DA, respectively, and cytokines IL-1, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12p70 and TNF were evaluated by CBA/BD Kit. Our data showed that: 1) infection by the Zika virus reduced the viability of neuroblasts and 1 μM atazanavir partially reversed this toxicity 2) infection with MOI 1 of the Zika virus caused death by necrosis and increased expression of caspase-3, however, incubation of neuroblasts with 1 μM atazanavir reduced this expression; 3) both inhibition and induction of the NF-kB pathway affected the viability of neuroblasts, in the presence or absence of the infection; 4) the inhibition of autophagy caused a reduction in the viability of neuroblasts, the latter being more evident in the presence of the infection; 5) infection by the Zika virus inhibited the production of ROS by neuroblasts, but this was partially reversed by atazanavir; 6) in the presence of the infection 0.1 MOI of the virus reduced the production of RNS and even atazanavir was not able to reverse this reduction; 7) in the presence of 1 MOI of the virus, there was an increase in the production of IL-1, TNF and more expressive of IL-6 and IL-8, while there was a reduction in IL-12p70; 8) the inhibitor of the production of RNS markedly decreased the viability of the cell, while ROS inductors also reduced the viability of neuroblasts. Taken together, the results suggest that atazanavir at a concentration of 1 μM may be a promising drug in Zika virus infection to protect neuroblasts, contributing to reduce the risk of microcephaly by decreasing the risk of death of neuroblasts during infection in pregnant women. However, it is required the continuity of studies to verify whether the protective action of atazanavir on neuroblasts observed in vitro would persist in pregnant women infected with the Zika virus and in the prevention of fetal malformations.-
Formato: dc.formatapplication/pdf-
Direitos: dc.rightsAcesso Aberto-
Direitos: dc.rightsA concessão da licença deste item refere-se ao termo de autorização impresso assinado pelo autor com as seguintes condições: Na qualidade de titular dos direitos de autor da publicação, autorizo a Universidade de Brasília e o IBICT a disponibilizar por meio dos sites www.bce.unb.br, www.ibict.br, http://hercules.vtls.com/cgi-bin/ndltd/chameleon?lng=pt&skin=ndltd sem ressarcimento dos direitos autorais, de acordo com a Lei nº 9610/98, o texto integral da obra disponibilizada, conforme permissões assinaladas, para fins de leitura, impressão e/ou download, a título de divulgação da produção científica brasileira, a partir desta data.-
Palavras-chave: dc.subjectNeuroblastos-
Palavras-chave: dc.subjectZika vírus-
Palavras-chave: dc.subjectAtazanavir-
Palavras-chave: dc.subjectERNs-
Palavras-chave: dc.subjectEROs-
Palavras-chave: dc.subjectCitocinas-
Título: dc.titleInfluência do Atazanavir nas vias inflamatórias em neuroblastos infectados ou não pelo vírus Zika-
Tipo de arquivo: dc.typelivro digital-
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