Cloning and expression of Aujeszky's disease virus glycoprotein E (gE) in a baculovirus system

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MetadadosDescriçãoIdioma
Autor(es): dc.creatorDambros, Régia Maria Feltrin-
Autor(es): dc.creatorRibeiro, Bergman Moraes-
Autor(es): dc.creatorAguiar, Raimundo Wagner de Souza-
Autor(es): dc.creatorSchaefer, Rejane-
Autor(es): dc.creatorEsteves, Paulo Augusto-
Autor(es): dc.creatorPerecmanis, Simone-
Autor(es): dc.creatorSimon, Neide Lisiane-
Autor(es): dc.creatorSilva, Nayara Cavalcante-
Autor(es): dc.creatorColdebella, Michele-
Autor(es): dc.creatorCiacci-Zanella, Janice Reis-
Data de aceite: dc.date.accessioned2024-10-23T15:32:06Z-
Data de disponibilização: dc.date.available2024-10-23T15:32:06Z-
Data de envio: dc.date.issued2017-12-07-
Data de envio: dc.date.issued2017-12-07-
Data de envio: dc.date.issued2007-
Fonte completa do material: dc.identifierhttp://repositorio.unb.br/handle/10482/27099-
Fonte completa do material: dc.identifierhttps://dx.doi.org/10.1590/S1517-83822007000300021-
Fonte: dc.identifier.urihttp://educapes.capes.gov.br/handle/capes/885511-
Descrição: dc.descriptionAujeszky' s disease (AD) is an infectious disease causing important economic losses to the swine industry worldwide. The disease is caused by an alpha-herpesvirus, Aujeszky' s disease virus (ADV), an enveloped virus with a double stranded linear DNA genome. The ADV genome encodes 11 glycoproteins, which are major targets for the immune system of the host in response to the infection. The glycoprotein E (gE) is a non-essential protein and deletion of the gE gene has been used for the production of marker vaccines. Aiming to develop molecular reagents for the production of a gE specific ELISA test, the gE gene was amplified by PCR, cloned and expressed into a baculovirus expression system. The recombinant DNA vector pFastBac-gE-ADV was used for site-specific transposition into the recombinant baculovirus (bacmid). Colonies with recombinant bacmid-pFastBac-gE-ADV were selected by antibiotic and color selection and the presence of the gE gene was confirmed by PCR. The recombinant bacmid-pFastBac-gE-ADV was cotransfected in insect Trichoplusia ni and the presence of the recombinant DNA and gE protein were detected by PCR, SDS-PAGE and Western blotting, respectively.-
Descrição: dc.descriptionA doença de Aujeszky (DA) é uma enfermidade infecto-contagiosa que causa grandes perdas econômicas ao produtor e à agroindústria suinícola em todo o mundo. É causada pelo vírus da doença de Aujeszky (VDA), um alfaherpesvírus envelopado com genoma DNA de fita dupla e linear. O genoma do VDA codifica 11 glicoproteínas, as quais são os maiores alvos do sistema imune do hospedeiro em resposta a infecção. A glicoproteína E (gE) é uma proteína não essencial e a deleção do gene da gE é muito utilizada para a produção de vacinas com marcadores. Com o objetivo de desenvolver insumos moleculares para a produção de um teste de ELISA específico para gE do VDA, a seqüência do gene da gE foi amplificada, clonada e expressa no sistema de expressão em baculovírus. O produto da amplificação foi clonado no vetor pGem®-T Easy e subclonado no plasmídeo de expressão pFastBac™1. O DNA recombinante pFastBac-gE-VDA foi usado para a transposição sítio-específica no baculovírus recombinante (bacmid). Após seleção por antibióticos e cor, as colônias com o recombinante bacmid-pFastBac-gE-VDA foram selecionadas e a presença do gene da gE foi confirmada por PCR. O DNA recombinante viral, bacmid-pFastBac-gE-VDA, foi usado para cotransfecção de células de inseto Trichoplusia ni e a presença do recombinante e a proteína gE foi determinada por PCR, por SDS-PAGE e Western blotting, respectivamente.-
Formato: dc.formatapplication/pdf-
Idioma: dc.languageen-
Publicador: dc.publisherSociedade Brasileira de Microbiologia-
Direitos: dc.rightsAcesso Aberto-
Palavras-chave: dc.subjectAujeszky-
Palavras-chave: dc.subjectGlycoprotein E-
Palavras-chave: dc.subjectBaculovírus-
Palavras-chave: dc.subjectRecombinant-
Palavras-chave: dc.subjectAujeszky-
Palavras-chave: dc.subjectGlicoproteína E-
Palavras-chave: dc.subjectBaculovírus-
Palavras-chave: dc.subjectRecombinante-
Título: dc.titleCloning and expression of Aujeszky's disease virus glycoprotein E (gE) in a baculovirus system-
Título: dc.titleClonagem e expressão da glicoproteina E (gE) do vírus da doença de Aujeszky em sistema de baculovirus-
Tipo de arquivo: dc.typelivro digital-
Aparece nas coleções:Repositório Institucional – UNB

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