Análise da expressão diferencial de proteases salivares em pacientes com Síndrome de Sjögren

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Autor(es): dc.contributorBastos, Izabela Marques Dourado-
Autor(es): dc.creatorChagas, Laís Garreto Alves de Almeida-
Data de aceite: dc.date.accessioned2024-10-23T14:59:24Z-
Data de disponibilização: dc.date.available2024-10-23T14:59:24Z-
Data de envio: dc.date.issued2020-06-24-
Data de envio: dc.date.issued2020-06-24-
Data de envio: dc.date.issued2019-12-05-
Fonte completa do material: dc.identifierhttps://repositorio.unb.br/handle/10482/38098-
Fonte: dc.identifier.urihttp://educapes.capes.gov.br/handle/capes/871559-
Descrição: dc.descriptionDissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2019.-
Descrição: dc.descriptionA Síndrome de Sjögren (SS) é uma doença autoimune caracterizada por destruição de glândulas exócrinas, principalmente as glândulas salivares e lacrimais. A saliva tem sido relatada como potencial meio de diagnóstico em diversas doenças, por meio da identificação de marcadores e padrões biológicos salivares. O presente estudo tem como objetivo avaliar a expressão diferencial de proteases salivares de indivíduos controle e SS. As amostras de saliva total estimulada de 40 indivíduos foram analisadas em substratos fluorogênicos sintéticos e na presença de inibidores de proteases. Zimografias foram realizada em SDSPAGE 8% copolimerizado com gelatina 0,1% (w/v) e na presença de inibidores de proteases. Amostras de um SDS-PAGE 8% contendo saliva de 9 indivíduos, separadamente (3 controle, 3 SS-primária, 3 SS-secundária), foram processadas e analisadas pelo EASY-nano LC em espectrometria de massas LTQ-Orbitrap Velos. Ainda, ensaios imunoenzimáticos foram realizados para corroborar os demais resultados. Os ensaios enzimáticos resultaram na proteólise mais intensa (p<0,05) de Gly-Pro-AMC em SS e de sua inibição por Sitagliptina, inibidor altamente seletivo de DPP-IV. O ELISA para DPP-IV/CD26 humana corroborou a caracterização proteolítica, exibindo maior intensidade de DPP-IV em SS. Nas zimografias, as bandas de 50 kDa e >220 kDa diferiram em intensidade (p<0,05) entre os grupos avaliados. As bandas de atividade proteolítica foram consideravelmente inibidas por EDTA, inibidor seletivo de MMP. O ELISA para MMP-9 confirmou a presença da protease e exibiu maior expressão (p<0,05) em saliva SS. As serinoproteases elastase neutrofílica, catepsina G e proteinase 3 foram reportadas apenas em saliva de SS, por meio da análise proteômica. Os resultados obtidos em ambos os ensaios sugerem que a atividade proteolítica salivar difere entre os grupos avaliados. Mais estudos são necessários, a fim de melhor compreender o papel das proteases na patogênese da SS.-
Descrição: dc.descriptionConselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)-
Descrição: dc.descriptionSjögren’s Syndrome (SS) is an autoimmune disease characterized by the destruction of exocrine glands, mainly salivary and lacrimal glands. Saliva has been reported as a potential tool for diagnosing several diseases, coming as a result of the identification of salivar biomarkers. The objective of this study was to evaluate the differential expression of salivar proteases from control and SS individuals. We tested whole stimulated saliva samples from 40 individuals on synthetic fluorogenic substrates and protease inhibitors, and performed zymogram assays by submitting samples to SDS-PAGE 8%, copolymerized with gelatin 0.1% (w/v) in the presence of inhibitors. Moreover, we analyzed gel samples from 3 control, 3 primary-SS, and 3 secondary-SS patients by EASY-nano LC coupled to LTQ-Orbitrap Velos mass spectrometry. The enzymatic assays resulted in Gly-Pro-AMC proteolysis and its inhibition by Sitagliptin, a highly selective inhibitor of dipeptidyl peptidase IV (DPP-IV). This enzymatic activity was increased (p<0.05) in SS samples. ELISA for Human DPP-IV/CD26 corroborated protease characterization results. In zymography, proteolytic activity bands were mostly inhibited by EDTA, a selective inhibitor of metalloprotease (MMP) family. 50 kDa and >220 kDa bands differed in intensity (p<0.05) between groups. ELISA for Human MMP-9 corroborated protease characterization and indicated a higher expression (p<0.05) in pSS samples. Cathepsin G, Neutrophil elastase and Proteinase 3 were serine proteases reported only in SS samples by mass spectrometry analysis. Results obtained in these assays suggest salivary protease expression differs between evaluated groups. We recommend further studies to better understand the role of proteases in the pathogenesis of SS.-
Descrição: dc.descriptionFaculdade de Medicina (FM)-
Descrição: dc.descriptionPrograma de Pós-Graduação em Patologia Molecular-
Formato: dc.formatapplication/pdf-
Direitos: dc.rightsAcesso Aberto-
Direitos: dc.rightsA concessão da licença deste item refere-se ao termo de autorização impresso assinado pelo autor com as seguintes condições: Na qualidade de titular dos direitos de autor da publicação, autorizo a Universidade de Brasília e o IBICT a disponibilizar por meio dos sites www.bce.unb.br, www.ibict.br, http://hercules.vtls.com/cgi-bin/ndltd/chameleon?lng=pt&skin=ndltd sem ressarcimento dos direitos autorais, de acordo com a Lei nº 9610/98, o texto integral da obra disponibilizada, conforme permissões assinaladas, para fins de leitura, impressão e/ou download, a título de divulgação da produção científica brasileira, a partir desta data.-
Palavras-chave: dc.subjectSíndrome de Sjögren-
Palavras-chave: dc.subjectSaliva-
Palavras-chave: dc.subjectProteases Salivares-
Palavras-chave: dc.subjectAtividade Proteolítica-
Palavras-chave: dc.subjectAnálise Proteômica-
Título: dc.titleAnálise da expressão diferencial de proteases salivares em pacientes com Síndrome de Sjögren-
Tipo de arquivo: dc.typelivro digital-
Aparece nas coleções:Repositório Institucional – UNB

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