Avaliação funcional da neurotransmissão colinérgica no epidídimo, ducto eferente e ducto deferente de rato e seu envolvimento com a secreção de clusterina

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MetadadosDescriçãoIdioma
Autor(es): dc.contributorMaróstica, Elisabeth-
Autor(es): dc.contributorOliveira, Ana Paula Santos da Silva-
Autor(es): dc.contributorRabelo, Aline Araújo-
Autor(es): dc.contributorBrito, Fernanda Carla Ferreira de-
Autor(es): dc.contributorhttp://lattes.cnpq.br/9236032668943432-
Autor(es): dc.contributorhttp://lattes.cnpq.br/9474048918939986-
Autor(es): dc.creatorMoreira, Tatiana Jales-
Data de aceite: dc.date.accessioned2024-07-11T18:46:22Z-
Data de disponibilização: dc.date.available2024-07-11T18:46:22Z-
Data de envio: dc.date.issued2019-12-17-
Data de envio: dc.date.issued2019-12-17-
Data de envio: dc.date.issued2019-
Fonte completa do material: dc.identifierhttps://app.uff.br/riuff/handle/1/12531-
Fonte completa do material: dc.identifierhttp://dx.doi.org/10.22409/PPGFF.2019.m.13652911709-
Fonte: dc.identifier.urihttp://educapes.capes.gov.br/handle/capes/777249-
Descrição: dc.descriptionEstudos anteriores do nosso laboratório demonstraram a expressão dos subtipos de receptores muscarínicos M1, M2 e M3 de acetilcolina nos ductos eferentes e no epidídimo de ratos, mas suas funções não foram totalmente esclarecidas. Considerando que a clusterina (CLU) é uma proteína abundante no epidídimo e importante para o processo de maturação dos espermatozoides, juntamente com o envolvimento da inervação autonômica na secreção de proteínas no epidídimo, o objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos de agonistas e antagonistas colinérgicos sobre a secreção da CLU em epidídimo, ductos eferentes e ducto deferente de rato. Para isso, ratos Wistar machos adultos (CEUA-UFF 931/17) foram randomizados em 6 grupos (n=6/grupo) e receberam 250μl (i.v.) contendo solução salina (CO); 0,04 mg.k-1 de carbacol (CA) na ausência ou presença de antagonistas: 1,8 mg.k-1 de atropina (AT), 0,5 mg.k-1 de pirenzepina (PI), 0,5 mg.k-1 de metoctramina (ME) ou 0,2 mg.k-1 de darifenacina (DA). Os animais foram mantidos sob anestesia e 2 horas após os tratamentos, os epidídimos foram retirados e dissecados. Homogenatos foram preparados para ensaios de western blot ou os tecidos, incluindo ductos eferentes e ducto deferente, foram incluídos em parafina para imuno-histoquímica. A avaliação espermática (motilidade progressiva, vigor, integridade da membrana e teste hipo-osmótico) foi realizada utilizando-se espermatozoides obtidos da cauda do epidídimo. Valores são média±EPM (ANOVA one-way, Newman-Keuls; P<0,05). Os resultados mostraram que não houve diferença estatística na expressão de CLU na cabeça do epidídimo entre os diferentes grupos experimentais, quando comparados ao controle. Na cauda proximal do epidídimo, o tratamento com a AT+CA, ME+CA e a PI+CA induziram um aumento na marcação de CLU na região apical e de estereocílios, com uma marcação mais intensa com a PI. O DA+CA não alterou a marcação da CLU nessa região. Tais resultados estão de acordo com resultados da análise de western blot, em que o tratamento com PI+CA aumentou consideravelmente a expressão proteica da CLU, mais do que a AT e a ME. No ducto deferente também se observou um aumento da expressão desta proteína com os mesmos tratamentos e nos ductos eferentes, a pirenzepina, particularmente, diminuiu a expressa da CLU. Quanto à avaliação da funcionalidade dos espermatozoides, nemhum parâmetro analisado foi alterado nos diferentes grupos. Em resumo, nossos dados sugerem que o bloqueio dos receptores muscarínicos do subtipo M1 e M2, mas não de M3, altera a expressão de CLU de forma variável, dependendo do tecido e segmento analisado, sugerindo o envolvimento desses receptores na modulação de processos secretórios e/ou regulatórios da expressão proteica e composição do fluido luminal, importantes para a maturação do gameta masculino-
Descrição: dc.descriptionPrevious studies from our laboratory have demonstrated the expression of acetylcholine M1, M2 and M3 muscarinic receptor subtypes in the efferent ducts and epididymis of rats, but their functions have not been fully clarified. Considering that clusterin (CLU) is an abundant protein in the epididymis and important for sperm maturation process, besides the involvement of autonomic innervation in protein secretion in the epididymis, the arm of this study was to evaluate the effects of cholinergic agonists and antagonists on CLU secretion in epididymis, efferent ducts and rat vas deferens. For that, adult male Wistar rats (CEUA-UFF 931/17) were randomized in 6 groups (n=6/group) and received 250μl (i.v.) containing saline (CO); carbacol (CA; 0.04 mg.k-1) in the absence or presence of antagonists: atropine (AT; 1.8 mg.k-1); pyrenzepine (PI; 0.5 mg.k-1) metoctramine (ME; 0,5 mg.k-1) or darifenacin (DA; 0.2 mg.k-1). The animals were kept under anesthesia and 2 hours after the treatments, the epididymis were removed and dissected. Homogenates were prepared for western blot assays or tissues, including efferent ducts and vas deferens, were embedded in paraffin for immunohistochemistry. Sperm evaluation (progressive motility, vigor, membrane integrity and hypo-osmotic test) was performed using sperm obtained from the epididymis cauda. Values are mean±SEM (one-way ANOVA, Newman-Keuls; P<0.05). The resuts showed that there was no statistical difference in CLU expression in the caput of epididymis among different experimental groups when compared to the control. In the proximal cauda of the epididymis, treatment with AT + CA, ME + CA and PI + CA induced an increase in CLU labeling in the apical and stereocilia region, with a more intense labeling with PI. DA + CA did not change the CLU stainning in this region. Such results are in agreement with results from western blot analysis, where PI + CA treatment considerably increased protein expression of CLU, more than AT and ME. In the vas deferens there was also increased expression of this protein with the same treatments and in the efferent ducts, pirenzepine, in particular, decreased the expression of CLU. Regarding the evaluation of sperm functionality, no parameter was changed in the different groups. In conclusion, our data suggest that blockade of M1 and M2 but not M3 subtype muscarinic receptors alters the expression of CLU in a variable manner, depending on the tissue and segment analyzed, suggesting the involvement of these receptors in the modulation of secretory processes and/or regulating protein expression and luminal fluid composition, important for male gamete maturation-
Descrição: dc.descriptionxvii, 99 f.-
Formato: dc.formatapplication/pdf-
Idioma: dc.languagept_BR-
Direitos: dc.rightsopenAccess-
Direitos: dc.rightsAttribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazil-
Direitos: dc.rightsopenAccess-
Direitos: dc.rightshttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/-
Direitos: dc.rightsCC-BY-SA-
Palavras-chave: dc.subjectReceptores muscarínicos-
Palavras-chave: dc.subjectClusterina-
Palavras-chave: dc.subjectEpididimo-
Palavras-chave: dc.subjectReceptores muscarínicos-
Palavras-chave: dc.subjectClusterina-
Palavras-chave: dc.subjectEpididimo-
Palavras-chave: dc.subjectMuscarinic receptor-
Palavras-chave: dc.subjectClusterin-
Palavras-chave: dc.subjectEpididymis-
Título: dc.titleAvaliação funcional da neurotransmissão colinérgica no epidídimo, ducto eferente e ducto deferente de rato e seu envolvimento com a secreção de clusterina-
Tipo de arquivo: dc.typeDissertação-
Aparece nas coleções:Repositório Institucional da Universidade Federal Fluminense - RiUFF

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