MODULAÇÃO DA VIA DA PI3K/AKT EM CULTURA DE CÉLULAS DE RETINA: PAPEL DO ÓXIDO NÍTRICO E VIAS DE SINALIZAÇÃO MEDIADAS POR CÁLCIOCALMODULINA

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MetadadosDescriçãoIdioma
Autor(es): dc.contributorCarvalho, Roberto Paes de-
Autor(es): dc.contributorCPF:88867757722-
Autor(es): dc.contributorhttp://lattes.cnpq.br/6093972827853331-
Autor(es): dc.contributorFidalgo, Thereza Christina Barja-
Autor(es): dc.contributorCPF:56657887922-
Autor(es): dc.contributorhttp://lattes.cnpq.br/7181616799746888-
Autor(es): dc.contributorVentura, Ana Lucia Marques-
Autor(es): dc.contributorCPF:77665545322-
Autor(es): dc.contributorhttp://lattes.cnpq.br/8566893832329138-
Autor(es): dc.contributorFerreira, Luiz Roberto Leão-
Autor(es): dc.contributorCPF:45745743522-
Autor(es): dc.contributorhttp://lattes.cnpq.br/6319604227674654-
Autor(es): dc.contributorAssreuy, Jamil-
Autor(es): dc.contributorCPF:33445576822-
Autor(es): dc.contributorhttp://lattes.cnpq.br/5936453117958596-
Autor(es): dc.creatorGarcía, Telmo Agustín Mejía-
Data de aceite: dc.date.accessioned2024-07-11T18:45:28Z-
Data de disponibilização: dc.date.available2024-07-11T18:45:28Z-
Data de envio: dc.date.issued2021-03-10-
Data de envio: dc.date.issued2009-06-18-
Data de envio: dc.date.issued2021-03-10-
Fonte completa do material: dc.identifierhttps://app.uff.br/riuff/handle/1/17256-
Fonte: dc.identifier.urihttp://educapes.capes.gov.br/handle/capes/776945-
Descrição: dc.descriptionPrevious studies have shown that nitric oxide (NO), produced from the NO donor Snitroso- Acetyl-D-L-Penicillamine (SNAP), inhibits apoptosis of purified retinal neurons in cultured through a cGMP/PKG-dependent mechanism also involving multiple kinase pathways including PI3K, MEK, PKA and CaMKs. The PI3K-AKT pathway and NO are important molecules with neuronal survival-promoting properties and which have shown to play an important role in plasticity associated with CNS development. The purpose of this study was to explore whether endogenous NO produced from L-ARG or exogenous NO from NO donor SNAP exerts its vital effects by activating the AKT protein kinase in cultures of chick retinal neurons. Cultures prepared from 8 day-oldchick embryo retinas were treated or not with SNAP or L-ARG and processed for the detection of AKT phosphorylation levels on Ser-473 and Thr-308 sites. Our results demonstrate that either SNAP or L-ARG lead to enhanced AKT phosphorylation in a concentration and time-dependent manner through the activation of soluble guanylyl cyclase. The effect was blocked by the enzyme inhibitors ODQ or LY83583, and mimicked by 8-Bromo cyclic GMP, a PKG activator or YC-1, a guanylyl cyclase activator. In addition, the effect of NO was also suppressed by LY294002, Wortmannin, KN93 or KN62, respectively indicating the involvement of phosphatidylinositol 3 kinase and calcium calmodulin-dependent protein kinase signaling pathways. Interestingly, pre-treatment by EGTA, a calcium chelator, or BAPTA-AM or Tapsigargin, intracellular calcium chelators, or Triflorperazine or W-7, calmodulin inhibitors, also abrogated the effects of SNAP or L-ARG. This revealed that the phosphorylation of AKT/PKB is mediated by calcium influx from extracellular medium and a calmodulin-dependent mechanism. NO from L-ARG or SNAP promoted Ca2+-influx through L-type Ca2+ channels. Furthermore, we found that NMDA receptor activation stimulates AKT/PKB and can be mimicked by cycloheximide or anisomycin (CHX, ANIS), two inhibitors of protein synthesis, and a consequent increase of an intracellular L-ARG pool available for NO synthesis. An additional result shows that activated AKT/PKB was translocated from cytoplasm to nucleus upon stimulation with SNAP or L-ARG. We then conclude that generation of endogenous or exogenous NO participates in the activation of AKT protein kinase in retinal neurons.-
Descrição: dc.descriptionFundação de Amparo a Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro-
Descrição: dc.descriptionEstudos prévios têm demonstrado que o óxido nítrico (NO), produzido a partir do doador SNAP, inibe a apoptose em cultura purificada de neurônios de retina através de um mecanismo dependente de GMP-cíclico, ativação da PKG, e também envolvendo várias proteínas cinases como PI3K, MEK, PKA, e CaMKs. A via da PI3K/AKT e NO são importantes sinalizadores envolvidos na sobrevivência celular que também apresentam um papel importante na plasticidade do Sistema Nervoso central (SNC). O propósito do presente estudo foi determinar o papel de NO endógeno, advindo da LARG ou do NO exógeno, advindo do SNAP, na modulação do nível de fosforilação da AKT/PKB em células de retina em cultura. Culturas preparadas a partir de embriões de galinha de 8 dias foram tratadas ou não com SNAP ou L-ARG e em seguida determinados os níveis de fosforilação da AKT/PKB no sítio da Serina-473 ou Treonina-308. Nossos resultados demonstram que SNAP e L-ARG promovem aumento da fosforilação da AKT/PKB de modo concentração e tempo dependente, através da ativação da Guanilil ciclase solúvel (GC-solúvel). Este efeito foi bloqueado com ODQ ou LY83583 e foi mimetizado por 8Br-GMP cíclico, um ativador da PKG, ou YC-1, um ativador da GC-solúvel. NO entanto, o efeito do NO foi bloqueado por LY294002, Wortmannin, KN93 ou KN62, sugerindo a participação das vias da PI3K e das CaMKs respectivamente. De modo interessante, o pré-tratamento com EGTA, BAPTA ou tapsigargina (TPG), quelantes de cálcio, ou Trifluorperazina (TRF) e W-7, inibidores de calmodulina, foi capaz de bloquear o efeito de SNAP e L-ARG. Estes dados sugerem que o efeito depende de um aumento de cálcio intracelular e dependência de calmodulina. O NO exógeno (SNAP) ou endógeno (L-ARG) promovem o influxo de calcio (45Ca2+) através de canais de cálcio tipo L. Por outro lado, a ativação de receptor de glutamato do tipo NMDA induz a fosforilação da AKT/PKB de modo mimetizado por inibidores da síntese de proteínas (CHX ou ANIS). Esses inibidores aumentam o pool intracelular de L-ARG e promovem a síntese de NO. Um resultado adicional mostra que o tratamento com SNAP ou L-ARG promove a translocação da AKT/PKB fosforilada para o núcleo. Concluímos que o NO de origem exógena ou endógena modula o nível da fosforilação da AKT/PKB nas culturas de retina de galinha.-
Formato: dc.formatapplication/zip-
Formato: dc.formatapplication/octet-stream-
Idioma: dc.languagept_BR-
Publicador: dc.publisherPrograma de Pós-graduação em Neuroimunologia-
Publicador: dc.publisherNeuroimunologia-
Direitos: dc.rightsAcesso Aberto-
Direitos: dc.rightsCC-BY-SA-
Palavras-chave: dc.subjectÓxido Nítrico-
Palavras-chave: dc.subjectAKT/PKB-
Palavras-chave: dc.subjectRetina animal-
Palavras-chave: dc.subjectL-ARG-
Palavras-chave: dc.subjectCHX-
Palavras-chave: dc.subjectANIS-
Palavras-chave: dc.subjectTranslocação nuclear-
Palavras-chave: dc.subjectCálciocalmodulina-
Palavras-chave: dc.subjectNitric oxide-
Palavras-chave: dc.subjectAKT / PKB-
Palavras-chave: dc.subjectAnimal retina, L-ARG-
Palavras-chave: dc.subjectCHX, ANIS, nuclear translocation-
Palavras-chave: dc.subjectCalciumcalmodulin-
Palavras-chave: dc.subjectCNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::IMUNOLOGIA-
Título: dc.titleMODULAÇÃO DA VIA DA PI3K/AKT EM CULTURA DE CÉLULAS DE RETINA: PAPEL DO ÓXIDO NÍTRICO E VIAS DE SINALIZAÇÃO MEDIADAS POR CÁLCIOCALMODULINA-
Título: dc.titleMODULATION VIA THE PI3K/AKT IN THE CULTURE OF CELLS OF RETINA:ROLE OF NITRIC OXIDE AND ROUTE OF SIGNALING BY MEDIOS CALCIUM CALMODULIN-
Tipo de arquivo: dc.typeTese-
Aparece nas coleções:Repositório Institucional da Universidade Federal Fluminense - RiUFF

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