Resistência aos carbapenêmicos em cepas de pseudomonas aeruginosa ST2236 e ST2237 não produtoras de carbapenemases

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MetadadosDescriçãoIdioma
Autor(es): dc.contributorTeixeira, Lenise Arneiro-
Autor(es): dc.contributorhttp://lattes.cnpq.br/6784202785521849-
Autor(es): dc.contributorPaula, Geraldo Renato de-
Autor(es): dc.contributorhttp://lattes.cnpq.br/2437059202877242-
Autor(es): dc.contributorCampana, Eloiza Helena-
Autor(es): dc.contributorhttp://lattes.cnpq.br/8543907865046777-
Autor(es): dc.contributorXimenes, Eulália Camelo Pessoa de Azevedo-
Autor(es): dc.contributorhttp://lattes.cnpq.br/2043884567771349-
Autor(es): dc.contributorSoares, Maria José dos Santos-
Autor(es): dc.contributorhttp://lattes.cnpq.br/0555075046479252-
Autor(es): dc.contributorMelo, Maria Celeste Nunes de-
Autor(es): dc.contributorhttp://lattes.cnpq.br/0580551464788795-
Autor(es): dc.contributorRobbs, Bruno Kaufmann-
Autor(es): dc.contributorhttp://lattes.cnpq.br/5790428453151512-
Autor(es): dc.contributorhttp://lattes.cnpq.br/7251491191545165-
Autor(es): dc.creatorSilva, Keila de Cássia Ferreira de Almeida-
Data de aceite: dc.date.accessioned2024-07-11T18:45:01Z-
Data de disponibilização: dc.date.available2024-07-11T18:45:01Z-
Data de envio: dc.date.issued2023-01-18-
Data de envio: dc.date.issued2023-01-18-
Fonte completa do material: dc.identifierhttp://app.uff.br/riuff/handle/1/27614-
Fonte completa do material: dc.identifierhttp://dx.doi.org/10.22409/PPG-CAPS.2021. d.07179410780-
Fonte: dc.identifier.urihttp://educapes.capes.gov.br/handle/capes/776785-
Descrição: dc.descriptionPseudomonas aeruginosa é um dos microrganismos mais frequentes em infecções nosocomiais, afetando principalmente pacientes imunocomprometidos. Altas taxas de mortalidade estão associadas à capacidade desse patógeno de desenvolver resistência antimicrobiana. Os carbapenêmicos são a primeira escolha para o tratamento de infecções por P. aeruginosa MDR. A resistência aos carbapenêmicos está frequentemente associada à hidrólise enzimática por carbapenemases. No entanto, na ausência de carbapenemases, outros mecanismos estão envolvidos, como perda da proteína OprD, superexpressão de bombas de efluxo e/ou AmpC. Este estudo teve como objetivo investigar os mecanismos de resistência aos carbapenêmicos (imipenem e meropenem) em cepas de P. aeruginosa não produtoras de carbapenemases, pertencentes a dois tipos clonais: ST2236 e ST2237. Cinco cepas resistentes aos carbapenêmicos (CR), uma cepa resistente somente ao imipenem (IR) e cinco suscetíveis aos carbapenêmicos (CS), coletadas de pacientes queimados e tanques de balneoterapia, foram analisadas neste estudo. A CIM, para imipenem e meropenem, foi determinada pelo teste epsilométrico e microdiluição em caldo. A cepa de P. aeruginosa ATCC27853 foi usada como controle em ambos os testes. Mutações no gene oprD foram investigadas em cinco cepas CR, uma IR e uma CS, por PCR, seguido de sequenciamento. A análise das sequências foi realizada por Lasergene Software e comparada com a cepa de referência PAO1. Os níveis transcricionais dos genes: mexA, mexX, mexC, mexE, oprD e ampC foram analisados por RT-qPCR para todas as cepas CR e IR (com e sem indução por imipenem) e todas CS. A cepa PAO1 foi utilizada como referência neste teste. A detecção fenotípica de superexpressão de efluxo e AmpC, foi avaliada pela redução da CIM na presença dos inibidores: PAβN e cloxacilina, respectivamente. As cepas CR apresentaram níveis moderados de resistência em ambos os testes de CIM para os carbapenêmicos avaliados. Apenas a cepa 24 (IR) foi suscetível ao meropenem. O sequenciamento do gene oprD revelou mutações pontuais e de deleções e inserções, com padrões de mutação semelhantes em cepas do mesmo ST. Nenhuma mutação de deleção ou inserção foi detectada no gene oprD das cepas ST2236 (3, 24 e 26); apenas substituições de pares de bases. No entanto, um códon de parada prematuro foi detectado apenas nas cepas resistentes deste ST (3 e 24). Mutações no gene oprD foram particularmente impactantes nas cepas ST2237 (2, 4, 5 e 31), uma vez que mutações de deleções e inserções foram detectadas. A não detecção de transcritos de oprD por RT-qPCR, confirma a ausência de porina nas cepas ST2237. Baixos níveis transcricionais foram detectados para oprD, incluindo a cepa 26 (CS). Apenas o sistema de efluxo MexXY-OprM foi superexpresso nas cepas CR e IR. Entretanto, o teste fenotípico não detectou superexpressão de efluxo e de AmpC. Níveis transcricionais elevados de ampC (>10X) foram encontrados em 50% das cepas resistentes não induzidas. Todas as cepas CR e IR induzidas mostraram um aumento na expressão de ampC (103X >PAO1). Conclui-se que, a redução e/ou perda de OprD associada à superexpressão de AmpC provavelmente é o principal mecanismo de resistência aos carbapenêmicos nas cepas avaliadas; e que a superexpressão de MexXY-OprM pode ter contribuído para esse fenótipo de resistência.-
Descrição: dc.descriptionCoordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior-
Descrição: dc.descriptionFundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro-
Descrição: dc.descriptionConselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico-
Descrição: dc.descriptionPseudomonas aeruginosa is one of the most frequent microorganism in nosocomial infections, affecting mainly immunocompromised patients. High mortality rates are associated with the ability of this pathogen to develop antimicrobial resistance. Carbapenems are the first choice for treating P. aeruginosa MDR infections. Carbapenem resistance is often associated with enzymatic hydrolysis by carbapenemases. However, in the absence of carbapenemases, other mechanisms are involved, like loss of OprD, overexpression of efflux pumps and/or chromosomal AmpC. This study aimed to investigate the mechanisms of carbapenem resistance in six isolates of non-carbapenemase-producing P. aeruginosa, which belong to two different sequence types (STs): ST2236 and ST2237. Five carbapenem-resistant P. aeruginosa (CR) strains, one imipenem-resistant (IR) strain, all non-carbapenemase-producing and five carbapenem-susceptible (CS) strains were analyzed in this study. These isolates were recovered from burn patients and balneotherapy tanks in a previous work. MICs for imipenem and meropenem were determined by epsilometric test and by broth microdilution method. P. aeruginosa ATCC27853 was used as control in both tests. Mutations in oprD gene were investigated in six CR strains, one IR strain and one CS by PCR, followed by sequencing. Sequences analysis were performed by Lasergene Software and compared with PAO1 reference strain. Transcriptional levels of mexA, mexX, mexC, mexE, oprD and ampC genes were analysed through RT-qPCR for all CR and IR (with and without induction by imipenem) and CS strains. P. aeruginosa PAO1 was used as reference strain. Phenotypic detection of efflux and AmpC overexpression was assessed by MIC reduction in the presence of the inhibitors: PAβN and cloxacillin, respectively. CR strains showed moderate levels of resistance in both MIC tests for the evaluated carbapenems. Only the IR strain (24) was susceptible to meropenem. Sequencing of oprD gene revealed both indel and point mutations in the analyzed strains with similar mutation patterns in strains of the same ST. No indel mutation was detected in the oprD gene of ST2236 strains (3, 24 and 26), only base pair substitutions. However, a premature stop codon was detected only in the resistant strains of this ST (3 and 24). Mutations in oprD gene were particularly impactful in ST2237 strains (2, 4, 5 and 31), since indel mutations were found causing loss of porin. Failure to detect oprD transcripts by RT-qPCR further confirms absence of porin on ST2237 strains. ST2236 strains showed low transcriptional levels for oprD including the susceptible strain (26). Only MexXY-OprM efflux system was overexpressed in IR and CR strains. However, the phenotypic test did not detect efflux and AmpC overexpression. High transcriptional levels (> 10X) of ampC were found in 50% of non-induced resistant strains. All induced CR and IR strains showed an increase in ampC expression, on the order of 103 times higher than PAO1. It is concluded from this study, the reduction and/or loss of OprD porin associated with AmpC overexpression is probably the main mechanism of resistance to carbapenems in the evaluated strains; and MexXY-OprM overexpression may have contributed to this resistance phenotype.-
Descrição: dc.description96 p.-
Formato: dc.formatapplication/pdf-
Idioma: dc.languagept_BR-
Direitos: dc.rightsOpen Access-
Direitos: dc.rightsCC-BY-SA-
Palavras-chave: dc.subjectPseudomonas aeruginosa-
Palavras-chave: dc.subjectCarbapenêmicos-
Palavras-chave: dc.subjectResistência-
Palavras-chave: dc.subjectOprD-
Palavras-chave: dc.subjectAmpC-
Palavras-chave: dc.subjectPseudomonas aeruginosa-
Palavras-chave: dc.subjectCarbapenemo-
Palavras-chave: dc.subjectResistência a antibióticos-
Palavras-chave: dc.subjectProdução intelectual-
Palavras-chave: dc.subjectPseudomonas Aeruginosa-
Palavras-chave: dc.subjectCarbapenems-
Palavras-chave: dc.subjectResistance-
Palavras-chave: dc.subjectOprd-
Palavras-chave: dc.subjectAmpc-
Título: dc.titleResistência aos carbapenêmicos em cepas de pseudomonas aeruginosa ST2236 e ST2237 não produtoras de carbapenemases-
Tipo de arquivo: dc.typeTese-
Aparece nas coleções:Repositório Institucional da Universidade Federal Fluminense - RiUFF

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