REGULAÇÃO DA SÍNTESE PROTEICA POR RECEPTORES NMDA EM CULTURAS DE RETINA: ENVOLVIMENTO DA eEF2 CINASE

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MetadadosDescriçãoIdioma
Autor(es): dc.contributorCarvalho, Roberto Paes de-
Autor(es): dc.contributorCPF:88867757722-
Autor(es): dc.contributorhttp://lattes.cnpq.br/6093972827853331-
Autor(es): dc.contributorSerfaty, Claudio Alberto-
Autor(es): dc.contributorCPF:45823855322-
Autor(es): dc.contributorhttp://lattes.cnpq.br/2434741735967189-
Autor(es): dc.contributorFrugulhetti, Izabel Christina de Palmer Paixao-
Autor(es): dc.contributorCPF:46322264753-
Autor(es): dc.contributorhttp://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4783557Z4-
Autor(es): dc.contributorFoguel, Debora-
Autor(es): dc.contributorCPF:75348377822-
Autor(es): dc.contributorhttp://lattes.cnpq.br/5704842232274071-
Autor(es): dc.contributorLopes, Paula Campello Costa-
Autor(es): dc.contributorCPF:77688688522-
Autor(es): dc.contributorhttp://lattes.cnpq.br/7887442300538430-
Autor(es): dc.creatorCadilhe, Daniel Veloso-
Data de aceite: dc.date.accessioned2024-07-11T18:42:19Z-
Data de disponibilização: dc.date.available2024-07-11T18:42:19Z-
Data de envio: dc.date.issued2021-03-10-
Data de envio: dc.date.issued2006-08-11-
Data de envio: dc.date.issued2021-03-10-
Data de envio: dc.date.issued2006-05-02-
Fonte completa do material: dc.identifierhttps://app.uff.br/riuff/handle/1/19374-
Fonte: dc.identifier.urihttp://educapes.capes.gov.br/handle/capes/775855-
Descrição: dc.descriptionProtein synthesis is a phenomenon that controls important developmental events such as survival, cell death and differentiation. It can be regulated by many pathways and protein kinases in different points of transcription and translation. One of these kinases, eEF2K, inhibits peptide chain elongation by phosphorylating the eucaryotic elongation factor 2 (eEF2). eEF2K is Ca2+/calmodulin-dependent and is stimulated by calcium influx through NMDA receptors (NMDAR). In the present work, we show the participation of NMDAR, ERK pathway and NO in the control of protein synthesis. Chick embryo retina cultures are incubated with [35S]-metionine or [3H]L-arginine using different protocols, lysed with 5% TCA and the precipitated radioactivity determined. Other cultures were lysed with SDS and after measurement of protein concentration were separated by SDS PAGE, transferred to PVDF membranes and incubated with anti-phosphoeEF2 antibody (P-eEF2). NMDA inibited both [35S]-metionine or [3H]L-arginine incorporation in proteins, and the maximal effect was observed with 1mM (47.5±5.9% and 61.8±12.7% of inihibition, respectively, n=4). The MEK inhibitor, PD 98059 (25µM), promoted an effect similar to NMDA, but incubation with both compounds showed no additive effect (n=3). However, LNitroarginine (L-NA -inhibitor of NOS) (500µM) increased the [35S]- methionine incorporation by 129,4±5.67% (n=3). NMDA also increased P-eEF2 in 15 minutes (158,4±26,7%) (n=3). However, PD98059 strongly diminished PeEF2 (27,9±4,3%) and the concomitant treatment with both NMDA and PD98059 partially inhibited the phosphorylaton (75,7±1,1%) (n=3). We have shown that NMDAR activation promotes an increase in P-eEF2 and inhibition of protein synthesis with concomitant elevation of free L-Arginine levels and NO prduction. PD98059 promotes an opposite effect even so diminishes the amino acid incorporation in proteins. We suggest that this mechanism can be very important in the regulation of synapse formation during embryonic development.-
Descrição: dc.descriptionFundação de Amparo a Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro-
Descrição: dc.descriptionA síntese de proteínas é um fenômeno que controla eventos importantes no desenvolvimento como sobrevivência, morte e diferenciação. Pode ser regulada por inúmeras vias e cinases em diferentes momentos da transcrição e tradução. Uma delas, a eEF2 cinase (eEF2K), inibe o alongamento da cadeia peptídica fosforilando o fator de alongamento eucariótico 2 (eEF2). A eEF2K é dependente de Ca2+/calmodulina sendo estimulada pelo influxo de Ca2+ através de receptores NMDA (NMDAR).Neste trabalho mostramos a participação do NMDAR, da via das cinases ativadas por sinal extracelular (ERKs) e do óxido nítrico (NO) no controle da síntese de proteínas. Culturas de retina de embriões de galinha foram incubadas com [35S]-metionina ou [3H]-arginina em diferentes tratamentos, lisadas com TCA 5% e a radioatividade do precipitado determinada. Outras culturas foram lisadas com SDS e suas proteínas dosadas e separadas em gel de eletroforese, transferidas para membrana de PVDF e subme-tidas à imunomarcação com anticorpo anti-fosfoeEF2 (P-eEF2). O NMDA inibiu a incorporação de [35S]-metionina e [3H]-arginina em proteínas, sendo o maior efeito obtido na concentração de 1mM (47.5±5.9% e 61.8±12.7% de inibição, respectivamente, n=4). O inibidor da MEK PD98059 (25µM) promoveu efeito igual ao NMDA, mas a incubação com ambos compostos não aumentou o efeito (n=3). Porém, 500µM de L-Nitroarginina, inibidor da NOS promoveu um aumento na incorporação de [35S]-metionina de 129,4±5.67% (n=3). NMDA também aumentou P-eEF2 em 15 minutos (158,4±26,7%) (n=3). No entanto, PD98059 diminuiu fortemente o teor de P-eEF2 (27,9±4,3%) e o tratamento conjunto inibiu parcialmente a fosforilação (75,7±1,1%) (n=3). Mostramos que a ativação de NMDAR promove aumento de P-eEF2 e inibição da síntese proteica, com aumento de L-argini-na livre e produção de NO. Já o PD98059 produziu efeito oposto embora diminua a incorporação de aminoácidos em proteínas. Sugerimos que este mecanismo pode ser importante na regulação da formação de sinapses durante o desenvolvimento embrionário.-
Formato: dc.formatapplication/pdf-
Idioma: dc.languagept_BR-
Publicador: dc.publisherPrograma de Pós-graduação em Neuroimunologia-
Publicador: dc.publisherNeuroimunologia-
Direitos: dc.rightsAcesso Aberto-
Direitos: dc.rightsCC-BY-SA-
Palavras-chave: dc.subjectReceptores NMDA-
Palavras-chave: dc.subjectEEF2-
Palavras-chave: dc.subjectCinase-
Palavras-chave: dc.subjectSíntese de Proteína-
Palavras-chave: dc.subjectRetina animal-
Palavras-chave: dc.subjectReceptor N-Metil-D-Aspartato-
Palavras-chave: dc.subjectNeuroimunologia-
Palavras-chave: dc.subjectNMDA Recetors-
Palavras-chave: dc.subjectEEF2-
Palavras-chave: dc.subjectKinase-
Palavras-chave: dc.subjectCNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::BIOQUIMICA-
Título: dc.titleREGULAÇÃO DA SÍNTESE PROTEICA POR RECEPTORES NMDA EM CULTURAS DE RETINA: ENVOLVIMENTO DA eEF2 CINASE-
Título: dc.titleRegulation of the protein synthesis by NMDA regulators in retina cultures...-
Tipo de arquivo: dc.typeDissertação-
Aparece nas coleções:Repositório Institucional da Universidade Federal Fluminense - RiUFF

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