Caracterização de biomarcadores tumorais em câncer de tireoide e de próstata

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Autor(es): dc.contributorGimba, Etel Rodrigues Pereira-
Autor(es): dc.contributorhttp://lattes.cnpq.br/8976892755529994-
Autor(es): dc.contributorFerreira, Luciana Bueno-
Autor(es): dc.contributorhttp://lattes.cnpq.br/8856929718126611-
Autor(es): dc.contributorOliveira, Karen de Jesus-
Autor(es): dc.contributorMarostica, Elisabeth-
Autor(es): dc.contributorFerrer, Valéria Pereira-
Autor(es): dc.contributorRangel, Luciana Pereira-
Autor(es): dc.contributorhttp://lattes.cnpq.br/1851705328751384-
Autor(es): dc.creatorLemos, Ana Emília Goulart-
Data de aceite: dc.date.accessioned2024-07-11T18:41:48Z-
Data de disponibilização: dc.date.available2024-07-11T18:41:48Z-
Data de envio: dc.date.issued2023-09-29-
Data de envio: dc.date.issued2023-09-29-
Fonte completa do material: dc.identifierhttp://app.uff.br/riuff/handle/1/30682-
Fonte: dc.identifier.urihttp://educapes.capes.gov.br/handle/capes/775680-
Descrição: dc.descriptionBiomarcadores são indicadores mensuráveis de processos fisiopatológicos ou de resposta a uma exposição farmacológica ou intervenção terapêutica. Os capítulos desta tese abordam os perfis de expressão e papéis funcionais de dois biomarcadores tumorais: a osteopontina (OPN) e o PCA3. A OPN é uma proteína superexpressa em diversas malignidades, incluindo o carcinoma de tireoide (CT), estando relacionada à regulação da transição epitelial-mesenquimal (EMT) e de características de células tronco tumorais (CSC). Existem cinco variantes de splicing da OPN: OPNa, b, c, 4 e 5, cujos papéis no carcinoma anaplásico da tireoide (CAT) precisam ser elucidados. O PCA3 é um RNA não codificante superexpresso no câncer de próstata (CaP), cuja contribuição na resistência e sensibilização a quimioterápicos ainda não foi descrita. Assim, objetivamos: 1) No CT, investigar o papel da OPNa na modulação de mecanismos moleculares subjacentes à plasticidade epitelial mesenquimal (EMP) e de características de CSC em células de CAT; 2) No CaP, investigar se o silenciamento do PCA3 sensibiliza as células LNCaP ao tratamento com o quimioterápico docetaxel (DXT). Com relação ao objetivo 1, avaliamos a expressão da OPNa, de marcadores de EMT e de CSC por PCR quantitativo em tempo real precedido por transcrição reversa (RT-qPCR) e Western blot, em células c643 superexpressando OPNa (c643-OPNa). Ensaios de formação de tiroesferas e seus perfis de expressão de marcadores de CSC foram avaliados. Em nível transcricional, as células c643-OPNa expressaram marcadores epiteliais e mesenquimais, e alguns marcadores de CSC, com aumento na expressão de N-caderina, SOX-2 e de LIN-28, embora sem significância estatística. Em nível proteico, estas células apresentaram tendência de aumento na expressão de N-caderina, NANOG e c-Myc, e de diminuição de vimentina. As células c643-OPNa formaram maior número de tiroesferas, as quais apresentaram tendência a expressar níveis mais elevados de SOX-2 e OCT-4 e mais reduzidos de NANOG. Com relação ao objetivo 2, avaliamos a expressão do PCA3 por RT-qPCR, a viabilidade celular por MTT e realizamos a contagem das células pelo ensaio de exclusão por azul de tripan. Os aspectos morfológicos das células foram analisados por microscopia óptica, a morte celular por apoptose e o ciclo celular por citometria de fluxo. Ao silenciar o PCA3, houve redução no número de células, de forma não significativa. Ao combinar o silenciamento do PCA3 ao tratamento com DXT 11,8 nM houve redução significativa do número de células LNCaP. As células adquiriram formato mais arredondado e houve redução de aglomerados celulares e densidade celular. Também ocorreu uma redução significativa no número de células aderidas. Não observamos alterações significativas nos índices de apoptose e nos percentuais de células nas diferentes fases do ciclo celular. Nossos dados sugerem que a superexpressão da OPNa em células de CAT não modula de forma significativa mecanismos subjacentes à EMP e características de CSC. No CaP, o silenciamento do PCA3 sensibiliza as células de CaP metastático ao tratamento com DXT, através de outros mecanismos celulares, diferentes da apoptose e do ciclo celular-
Descrição: dc.descriptionCoordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior-
Descrição: dc.descriptionFundação para a Ciência e a Tecnologia-
Descrição: dc.descriptionPrograma de Oncobiologia-
Descrição: dc.descriptionFundação Carlos Chagas Filho de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro-
Descrição: dc.descriptionUniversidade Federal Fluminense. Pró-Reitoria de Pesquisa, Pós-Graduação e Inovação-
Descrição: dc.descriptionBiomarkers are measurable indicators of pathophysiological processes or of response to pharmacological exposure or therapeutic interventions. The chapters of this thesis deal with the expression profiles and functional roles of two tumor biomarkers: osteopontin (OPN) and PCA3. OPN is a protein overexpressed in several malignancies, including thyroid carcinoma (TC), being related to the regulation of epithelial-mesenchymal transition (EMT) and characteristics of cancer stem cells (CSC). There are five splicing variants of OPN: OPNa, b, c, 4 and 5, whose roles in the anaplastic thyroid carcinoma (ATC) still need to be elucidated. PCA3 is a noncoding RNA overexpressed in prostate cancer (PCa), whose contribution to resistance and sensitization to chemotherapy has not been described. Thus, we aimed to: 1) In TC, investigate the role of OPNa in the modulating molecular mechanisms underlying epithelial-mesenchymal plasticity and CSC in ATC cells; 2) In PCa, investigate if PCA3 silencing sensitizes LNCaP cells to docetaxel (DTX) chemotherapy. In relation to the first aim, we evaluated the expression of OPNa, EMT and CSC markers by quantitative reverse transcription real time PCR (RT-qPCR) and Western blot in c643 cells overexpressing OPNa (c643-OPNa). Thyrosphere forming assay and their expression profile of CSC markers were evaluated. In transcriptional level, c643-OPNa cells expressed epithelial and mesenchymal markers, some more CSC markers with an increase of N-cadherin, SOX-2 and LIN-28 expression, although not attaining statistical significance. In protein level, we observed a tendency to increase the expression of Ncadherin, NANOG and c-Myc and to decrease the expression of vimentin in these cells. The c643-OPNa cells formed a greater number of thyrospheres, which showed a trend toward increased expression of SOX-2 and OCT-4 markers and decreased expression of NANOG. In respect to the second aim, we evaluated the PCA3 expression by RTqPCR, cell viability by MTT assay and cell counting by trypan blue exclusion assay. LNCaP cell morphology analysis was performed by optic microscopy, cell death by apoptosis and cell cycle analysis were conducted by flow cytometry. In PCA3 silencing context, we observed a decrease in the LNCaP cell number, not significant. In response to PCA3 silencing in combination with DTX 11.8 nM treatment, the number of LNCaP cell number were significantly reduced. The cells acquired a more rounded shape and there was a reduction of cell clusters and density. There was also a significantly reduction in the number of adhered cells. There were no significant changes in the apoptotic index nor the cell cycle distribution. Our findings suggest that the OPNa overexpression in ATC cells does not significantly modulate mechanisms underlying EMP and CSC features. In PCa, PCa3 silencing sensitizes metastatic PCa cells to DTX treatment, through other cellular mechanisms different from apoptosis and the cell cycle-
Descrição: dc.description178 f.-
Formato: dc.formatapplication/pdf-
Idioma: dc.languagept_BR-
Direitos: dc.rightsOpen Access-
Direitos: dc.rightsCC-BY-SA-
Palavras-chave: dc.subjectBiomarcadores tumorais-
Palavras-chave: dc.subjectCâncer de tireóide-
Palavras-chave: dc.subjectCâncer de próstata-
Palavras-chave: dc.subjectOsteopontina-a-
Palavras-chave: dc.subjectRNA longo não codificante PCA3-
Palavras-chave: dc.subjectQuimiorresistência-
Palavras-chave: dc.subjectBiomarcadores tumorais-
Palavras-chave: dc.subjectNeoplasias da glândula tireoide-
Palavras-chave: dc.subjectNeoplasias da próstata-
Palavras-chave: dc.subjectOsteopontina-
Palavras-chave: dc.subjectRNA longo não codificante-
Palavras-chave: dc.subjectResistência a medicamentos-
Palavras-chave: dc.subjectTumor biomarkers-
Palavras-chave: dc.subjectThyroid cancer-
Palavras-chave: dc.subjectProstate cancer-
Palavras-chave: dc.subjectOsteopontin-a-
Palavras-chave: dc.subjectLong non-coding RNA PCA3-
Palavras-chave: dc.subjectChemoresistance-
Título: dc.titleCaracterização de biomarcadores tumorais em câncer de tireoide e de próstata-
Tipo de arquivo: dc.typeTese-
Aparece nas coleções:Repositório Institucional da Universidade Federal Fluminense - RiUFF

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