Caracterização das células tronco da polpa dentária obtidas de indivíduos com neurofibromatose tipo 1 e sua utilização para estudo in vitro ed condrócitos diferenciados em cultivo bi e tridimensional

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MetadadosDescriçãoIdioma
Autor(es): dc.contributorCunha, Karin Soares Gonçalves-
Autor(es): dc.contributorhttp://lattes.cnpq.br/2530104978789735-
Autor(es): dc.contributorRossi, Maria Isabel Doria-
Autor(es): dc.contributorhttp://lattes.cnpq.br/8821725800352951-
Autor(es): dc.contributorSilva Júnior, Arley-
Autor(es): dc.contributorhttp://lattes.cnpq.br/9066619136266441-
Autor(es): dc.contributorPetito, Rafael Braga-
Autor(es): dc.contributorhttp://lattes.cnpq.br/6219727602155799-
Autor(es): dc.contributorDuarte, Maria Eugênia Leite-
Autor(es): dc.contributor: http://lattes.cnpq.br/8319260996703557-
Autor(es): dc.contributorGeller, Mauro-
Autor(es): dc.contributorhttp://lattes.cnpq.br/1616947842612843-
Autor(es): dc.contributorBrito Neto, José Marques-
Autor(es): dc.contributorhttp://lattes.cnpq.br/2881292492337530-
Autor(es): dc.contributorhttp://lattes.cnpq.br/5488049016726039-
Autor(es): dc.creatorAlmeida, Paula Nascimento-
Data de aceite: dc.date.accessioned2024-07-11T18:28:16Z-
Data de disponibilização: dc.date.available2024-07-11T18:28:16Z-
Data de envio: dc.date.issued2022-12-04-
Data de envio: dc.date.issued2022-12-04-
Fonte completa do material: dc.identifierhttp://app.uff.br/riuff/handle/1/27160-
Fonte: dc.identifier.urihttp://educapes.capes.gov.br/handle/capes/771204-
Descrição: dc.descriptionIntrodução: A neurofibromatose tipo 1 é uma síndrome genética com grande variedade de manifestações clínicas e estudos procurando compreender os mecanismos celulares e moleculares subjacentes às suas manifestações clínicas são de grande importância para melhor conhecimento da patogenia e desenvolvimento de novas terapêuticas. As células-tronco da polpa dentária estão sendo usadas como modelo in vitro para várias doenças genéticas e são uma alternativa interessante para o estudo da neurofibromatose tipo 1. Objetivo: Caracterizar as células-tronco da polpa dentária de indivíduos com neurofibromatose tipo 1 e investigar seu potencial in vitro de diferenciação condrogênica. Material e Métodos: Células-tronco da polpa dentária de indivíduos com e sem neurofibromatose tipo 1 foram obtidas a partir de terceiros molares com indicação de exodontia. A análise da expressão de antígenos de superfície, o potencial clonogênico e perfis de proliferação e senescência nas culturas NF (de indivíduos com neurofibromatose tipo 1) foram avaliados e comparados com culturas controles. Como parte da caracterização das células-tronco da polpa dentária, avaliou-se a diferenciação osteogênica e adipogênica, além da condrogênica, em cultivo bidimensional. A diferenciação condrogênica também foi realizada em cultivo tridimensional (pellets) e avaliada utilizando microscopia ótica, com os cortes corados com hematoxilina e eosina e Alcian Blue. Os cortes também foram submetidos à técnica de imuno-histoquímica para avaliação da expressão do Ki-67. Além disto, os pellets foram avaliados morfologicamente através de cortes semifinos e de microscopia eletrônica de transmissão. Resultados: As células-tronco da polpa dentária, tanto das duas culturas NF quanto das três culturas controles, foram positivas para CD90, CD105, CD146 e negativas para CD13, CD14, CD45 e CD271. As culturas NF mostraram maior potencial proliferativo e senescência tardia comparadas com as culturas controles. Não houve diferença significativa na quantidade de depósitos lipídicos entre as culturas NF e controles após a diferenciação adipogênica. No cultivo bidimensional, observou-se diferença significativa na produção de cálcio e matriz extracelular após as diferenciações osteogênica e condrogênica, respectivamente, entre culturas NF e controles. As culturas NF produziram metade do cálcio produzido pelo grupo controle. Em contrapartida, observou-se maior deposição de matriz extracelular nas culturas NF após diferenciação condrogênica. A avaliação morfológica dos pellets evidenciou sucesso na diferenciação condrogênica em todas as culturas, apresentando-se corados pelo Alcian Blue. Nos cortes semifinos, as culturas NF mostraram vesículas de matriz de tamanhos variados, enquanto que nas culturas controles o tamanho manteve-se homogêneo. Em todas as culturas celulares, vesículas estavam presentes no citoplasma e extracelularmente. A análise da microscopia eletrônica de transmissão dos pellets diferenciados corrobora com os dados encontrados na diferenciação condrogênica em cultivo bidimensional. Maior quantidade de fibras controles. Conclusão: As células-tronco da polpa dentária de indivíduos com neurofibromatose tipo 1 apresentam diferenças significativas com relação à produção de matriz durante o processo de condrogênese in vitro, em modelos bi e tridimensionais, comparadas com as controles, sendo, portanto, ferramentas úteis para estudos futuros sobre patogênese das alterações ortopédicas e possível desenvolvimento de novas terapias.-
Descrição: dc.descriptionIntroduction: Neurofibromatosis 1 is a genetic syndrome with a wide range of clinical manifestations and studies seeking to understand the cellular and molecular mechanisms underlying its clinical manifestations are of great importance for a better knowledge of the pathogenesis and the development of new therapies. Dental pulp stem cells are being used as an in vitro model for several diseases and appear as a suitable model for neurofibromatosis 1. Aim: To characterize dental pulp stem cells from individuals with neurofibromatosis 1 and investigate their in vitro potential for chondrogenic differentiation. Material and Methods: Dental pulp stem cells from individuals with and without neurofibromatosis 1 were obtained from human third molars with indication of extraction. The analysis of surface antigens expression, clonogenic potential as well as proliferative and senescence profiles of NF cultures (from individuals with neurofibromatosis 1) were evaluated, and compared with control cultures. To characterize dental pulp stem cells, they were induced to differentiate towards adipogenic, osteogenic, and chondrogenic lineages, in bidimensional culture. Chondrogenic differentiation was also performed in tridimensional culture (pellets), and was evaluated by bright-field optical microscopy, using the cuts stained with hematoxilin and eosin and Alcian Blue. The cuts were also submitted to immunohistochemical technique for evaluation of Ki-67 expression. In addition, the pellets were evaluated morphologically through semithin cuts and transmission electron microscopy Results: Dental pulp stem cells from both NF and control cultures were positive for CD90, CD105, CD146 and negative for CD13, CD14, CD45 and CD271. NF cultures showed greater proliferative potential and delayed senescence comparing with control cultures. There was no difference between NF dental pulp stem cells and controls regarding lipid deposit after adipogenic differentiation. In the bidimensional culture, significant difference in production of calcium and extracellular matrix was observed in osteogenic and chondrogenic differentiation, respectively, between NF dental pulp stem cells and controls. NF cultures produced half of calcium deposit found in control group. In contrast, greater extracellular matrix deposition was seen in NF cultures after chondrogenic differentiation. Pellets’ morphological evaluation showed success in chondrogenic differentiation in all cultures, being stained by Alcian Blue. In the semithin sections, NF cultures showed matrix vesicles of different sizes, whereas in the control cultures, they were homogeneous. In all cell cultures, vesicles were present in the cytoplasm and extracellularly. The analysis of transmission electron microscopy of differentiated pellets corroborates with the data found in chondrogenic differentiation in bidimensional culture. Higher amount of collagen fibers was found in the NF cultures compared with the control cultures. Conclusion: Dental pulp stem cells of individuals with neurofibromatosis 1 present significant differences regarding matrix production during in vitro chondrogenesis in bi and tridimensional models and are therefore useful tools for future studies on the pathogenesis of orthopedic alterations and the possible development of new therapies.-
Descrição: dc.description116 f.-
Formato: dc.formatapplication/pdf-
Idioma: dc.languagept_BR-
Direitos: dc.rightsOpen Access-
Direitos: dc.rightsCC-BY-SA-
Palavras-chave: dc.subjectNeurofibromatose 1-
Palavras-chave: dc.subjectCélulas-tronco da polpa dentária-
Palavras-chave: dc.subjectCondrogênese-
Palavras-chave: dc.subjectNeurofibromatose-
Palavras-chave: dc.subjectCélula-tronco-
Palavras-chave: dc.subjectPolpa dentária-
Palavras-chave: dc.subjectCondrogênese-
Palavras-chave: dc.subjectNeurofibromatosis 1-
Palavras-chave: dc.subjectDental pulp stem cell-
Palavras-chave: dc.subjectChondrogenesis-
Título: dc.titleCaracterização das células tronco da polpa dentária obtidas de indivíduos com neurofibromatose tipo 1 e sua utilização para estudo in vitro ed condrócitos diferenciados em cultivo bi e tridimensional-
Tipo de arquivo: dc.typeTese-
Aparece nas coleções:Repositório Institucional da Universidade Federal Fluminense - RiUFF

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