Desenvolvimento de ensaio de PCR em tempo real multiplex para a detecção simultânea dos vírus Epstein-Barr e Gammaherpesvírus humano 8 associados ao câncer

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MetadadosDescriçãoIdioma
Autor(es): dc.contributorPaula, Vanessa Salete de-
Autor(es): dc.contributorhttp://lattes.cnpq.br/4263649394978141-
Autor(es): dc.contributorRibeiro, Manuel Gustavo Leitão-
Autor(es): dc.contributorhttp://lattes.cnpq.br/8039485934181427-
Autor(es): dc.contributorVieira, Carmen Baur-
Autor(es): dc.contributorhttp://lattes.cnpq.br/2839864327645607-
Autor(es): dc.contributorLopes, Amanda de Oliveira-
Autor(es): dc.contributorhttp://lattes.cnpq.br/4320705257259315-
Autor(es): dc.contributorCastro, Tatiana Xavier de-
Autor(es): dc.contributorhttp://lattes.cnpq.br/1640183835782217-
Autor(es): dc.contributorhttp://lattes.cnpq.br/6722510526445850-
Autor(es): dc.creatorMedeiros, Letícia D' Ambrosio de Souza-
Data de aceite: dc.date.accessioned2024-07-11T18:26:31Z-
Data de disponibilização: dc.date.available2024-07-11T18:26:31Z-
Data de envio: dc.date.issued2023-08-02-
Data de envio: dc.date.issued2023-08-02-
Fonte completa do material: dc.identifierhttp://app.uff.br/riuff/handle/1/29735-
Fonte: dc.identifier.urihttp://educapes.capes.gov.br/handle/capes/770649-
Descrição: dc.descriptionO Gammaherpesvírus humano 8 (HHV-8) e o Gammaherpesvírus humano 4 (HHV-4/EBV) são vírus responsáveis por 2-3% dos tumores em homens, tendo sua primeira infecção em sua maioria assintomática. O Epstein-Barr (EBV) está associado ao linfoma de Burkitt, doença de Hodgkin, linfomas da célula NK/T e carcinomas de pele, gástrico e nasofaríngeo. O HHV-8 está associado a doenças como sarcoma de Kaposi, doença de Castleman e linfoma de efusão primário. A co-infecção entre os vírus HHV-8 e EBV pode aumentar a tumorigênese, formando neoplasias associadas. Deste modo, este projeto teve como objetivo desenvolver um ensaio multiplex, baseado na técnica de PCR em tempo real, para detecção dos EBV e HHV-8 em pacientes com cânceres associados, visando maior rapidez na detecção para um melhor manejo clínico dos pacientes, avaliando recaídas, resposta ao tratamento de câncer e a detecção de recidivas. Sequências de regiões conservadas de EBV (EBNA1) e HHV-8 (ORF26) disponíveis no GenBank foram avaliadas para definição das sondas e oligonucleotídeos. O desenvolvimento do PCR em tempo real multiplex foi realizado com o uso de curvas padrão sintéticas. A sensibilidade e especificidade foram avaliadas no e multiplex e foi obtido um resultado satisfatório. Os resultados foram de 100% de sensibilidade para ambos os vírus, 88% de especificidade para EBV e 100% para HHV-8. Quanto à repetitividade e a reprodutibilidade, 3 pontos da curva sintética foram avaliados e tiveram bons resultados, apresentando baixo desvio padrão. Na reprodutibilidade, os maiores desvios padrão foram: +/- 1,22 e +/- 0,58 para EBV e HHV-8, respectivamente. Já na repetitividade os maiores valores foram: +/- 1,75 para EBV e +/- 1,67 para HHV-8. Além disso, parâmetros da curva standard obtiveram bons valores. O slope obtido foi de -3,29 para EBV e -3,406 para HHV-8, o R² de 0,999 para ambos os vírus e a eficiência de 101,35% para EBV e 96,6% para HHV-8. Como resultado foi comprovado que o PCR em tempo real multiplex de EBV e HHV-8 consegue detectar ambos os Gammaherpesvírus humanos comprovando alta eficiência avaliada pelos parâmetros demonstrados.-
Descrição: dc.descriptionConselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico-
Descrição: dc.descriptionThe Human Gammaherpesvirus 8 (HHV-8) and Human Gammaherpesvirus 4 (HHV-4/EBV) are viruses responsible for 2-3% of the tumor in men, with their first infection mostly asymptomatic. Epstein-Barr (EBV) is associated with Burkitt lymphoma, Hodgkin’s disease, NK/T cell lymphoma and skin, gastric and nasopharyngeal carcinoma. HHV-8 is associated with diseases as Kaposi’s Sarcoma, Castleman’s disease and primary effusion lymphoma. Co-infection between HHV-8 and EBV increases tumorigenesis leading to associated neoplasms. In this way, this project aimed to develop a multiplex assay based on real time PCR technique for detecting EBV and HHV-8 in patients with associated cancers, aiming for a faster detection for better clinical management of patients, evaluating relapses, response to cancer treatment, and detection of recurrences. Sequences of conserved regions of EBV (EBNA1) and HHV-8 (ORF26) available in GenBank were evaluated for probes and primers design. The development of real time multiplex PCR was performed using standard curves. Sensitivity and specificity were evaluated in the multiplex and a satisfactory result were obtained. The results showed 100% sensitivity for both viruses, 88% specificity for EBV and 100% for HHV-8. Regarding repeatability and reproducibility, 3 points of the standard curve were evaluated and yielded good results, with low standard deviation. In reproducibility, the highest standard deviation were: +/- 1,22 and +/-0,58 for EBV and HHV-8, respectively. In repeatability the highest values were: +/- 1,75 for EBV and +/- 1,67 for HHV-8. Additionally, parameters of the standard curve obtained good values. The slope obtained was -3.29 for EBV and -3.406 for HHV-8, R² of 0.999 for both viruses, and efficiency of 101.35% for EBV and 96.6% for HHV-8. As result, it was proven that the real time multiplex PCR of EBV and HHV-8 can detect both human Gammaherpesviruses demonstrating high efficiency as assessed by the parameters shown.-
Descrição: dc.description57 p.-
Formato: dc.formatapplication/pdf-
Idioma: dc.languagept_BR-
Direitos: dc.rightsOpen Access-
Direitos: dc.rightsCC-BY-SA-
Palavras-chave: dc.subjectGammaherpesvírus humano 8, vírus Epstein Barr, PCR em tempo real, PCR em tempo real multiplex-
Palavras-chave: dc.subjectHerpesvírus humano 4, Neoplasia, Reação em cadeia da polimerase-
Palavras-chave: dc.subjectHuman Gammaherpesvírus 8, Epstein Barr virus, real time PCR, multiplex qPCR-
Título: dc.titleDesenvolvimento de ensaio de PCR em tempo real multiplex para a detecção simultânea dos vírus Epstein-Barr e Gammaherpesvírus humano 8 associados ao câncer-
Tipo de arquivo: dc.typeTrabalho de conclusão de curso-
Aparece nas coleções:Repositório Institucional da Universidade Federal Fluminense - RiUFF

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