Modulação da densidade e localização celular do ENT1 pelo bloqueio da ERK em culturas mistas da retina de Gallus gallus

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MetadadosDescriçãoIdioma
Autor(es): dc.contributorRodrigues, Alexandre dos Santos-
Autor(es): dc.contributorCarvalho, Roberto Paes de-
Autor(es): dc.contributorNascimento, Amanda Alves-
Autor(es): dc.contributorChagas, Luana da Silva-
Autor(es): dc.contributorRodrigues, Alexandre dos Santos-
Autor(es): dc.creatorGallonetti, Bismillah Cabral Pereira de Almeida-
Data de aceite: dc.date.accessioned2024-07-11T17:58:11Z-
Data de disponibilização: dc.date.available2024-07-11T17:58:11Z-
Data de envio: dc.date.issued2023-08-07-
Data de envio: dc.date.issued2023-08-07-
Fonte completa do material: dc.identifierhttp://app.uff.br/riuff/handle/1/29807-
Fonte: dc.identifier.urihttp://educapes.capes.gov.br/handle/capes/761093-
Descrição: dc.descriptionA adenosina é um nucleosídeo considerado um neuromodulador, estando presente em todo o sistema nervoso central (SNC). Ela pode ser liberada e captada tanto por neurônios quanto por células gliais. As concentrações intracelular e extracelular de adenosina são reguladas pela atividade de enzimas extra e intracelulares, assim como pela atividade dos transportadores de nucleosídeos (ENTs e CNTs), sendo que o transportador equilibrativo de nucleosídeos do tipo 1 (ENT1) é o principal transportador responsável pela captação de adenosina em culturas mistas (neurônios e células gliais) de retina de galinha. A modulação de vias intracelulares de sinalização pode modificar a atividade do ENT1. Nosso modelo utilizado é a retina de embrião de galinha (espécie Gallus gallus). O objetivo deste trabalho foi entender como o bloqueio da via da ERK pelo inibidor da MEK, U0126, influencia na liberação/captação de adenosina por culturas mistas da retina de galinha e avaliar os efeitos da inibição dessa MAP quinase na expressão e localização celular do ENT1. Inibidores de outras proteínas cinases também foram analisados. Os resultados mostram que a viabilidade celular não foi afetada pelo tratamento com U0126 (10 μM), mas que induziu uma redução maior que 50% na captação de [³H]-adenosina, quando comparado ao controle. A liberação de purinas não mostrou diferenças significativas nas diferentes condições experimentais testadas. A análise da densidade proteica do lisado total celular por western blotting não mostrou diferenças nos níveis de ENT1, mas o ensaio de biotinilação mostrou uma tendência para a diminuição da expressão de ENT1 na membrana plasmática das células após a inibição da ERK. Além disso, a quantificação da co-localização de ENT1 com células neuronais e gliais não mostrou diferenças significativas do tratamento com U0126 em comparação ao controle. Os resultados mostram que a inibição da via da ERK pode estar internalizando o ENT1, mas não degradando-o e que esse efeito seria semelhante tanto nas células neuronais quanto nas células gliais.-
Descrição: dc.descriptionAdenosine is a nucleoside considered a neuromodulator, being present throughout the central nervous system (CNS). It can be released and taken up by both neurons and glial cells. The intracellular and extracellular concentrations of adenosine are also regulated by the activity of nucleoside transporters (ENTs and CNTs), with ENT1 being the main responsible for adenosine uptake in mixed cultures. Modulation of intracellular pathways can modify ENT1 activity. Our model used is the chicken embryonic retina (Gallus gallus species). The objective of this work was to understand how the blocking of the ERK pathway by the MEK inhibitor, U0126, influences the release/uptake of adenosine by mixed cultures of chicken retina and to evaluate the effects of the inhibition of this MAP kinase in the expression and cellular localization of ENT1. Inhibitors of other protein kinases have also been analyzed. The results show that cell viability was not affected by treatment with U0126 (10 μM), but that it induced a greater than 50% reduction in [³H]-adenosine uptake when compared to control. Purine release did not show significant differences in the different experimental conditions tested. Protein analysis did not show differences in the overall ENT1 levels of cells, but the biotinylation assay showed a trend towards decreased expression of ENT1 in the plasma membrane of cells following ERK inhibition. Furthermore, quantification of ENT1 co-localization with neuronal and glial cells showed no significant differences between U0126 treatment and control. The results show that inhibition of the ERK pathway could be internalizing ENT1, but not degrading it, and that this effect would be similar in both neuronal and glial cells.-
Descrição: dc.description36 f.-
Formato: dc.formatapplication/pdf-
Idioma: dc.languagept_BR-
Direitos: dc.rightsOpen Access-
Direitos: dc.rightsCC-BY-SA-
Palavras-chave: dc.subjectAdenosina-
Palavras-chave: dc.subjectERK-
Palavras-chave: dc.subjectTransportador equilibrativo de nucleosídeos-
Palavras-chave: dc.subjectRetina-
Palavras-chave: dc.subjectPKA-
Palavras-chave: dc.subjectProteína cinase regulada por sinais extracelulares-
Palavras-chave: dc.subjectNucleosídeo-
Palavras-chave: dc.subjectNeuróglia-
Palavras-chave: dc.subjectEmbrião de galinha-
Palavras-chave: dc.subjectAdenosine-
Palavras-chave: dc.subjectEquilibrative nucleoside transporter-
Título: dc.titleModulação da densidade e localização celular do ENT1 pelo bloqueio da ERK em culturas mistas da retina de Gallus gallus-
Tipo de arquivo: dc.typeTrabalho de conclusão de curso-
Aparece nas coleções:Repositório Institucional da Universidade Federal Fluminense - RiUFF

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