Inovação do uso da metodologia automatizada de citologia em meio líquido para a avaliação da expressão da proteína ki-67 através da imunocitoquímica e aspectos morfológicos nucleares de fibroblastos cultivados in vitro

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MetadadosDescriçãoIdioma
Autor(es): dc.contributorCunha, Karin Soares Gonçalves-
Autor(es): dc.contributorhttp://lattes.cnpq.br/2530104978789735-
Autor(es): dc.contributorSilva, Anna Karoline Fausto da-
Autor(es): dc.contributorhttp://lattes.cnpq.br/9509840957272773-
Autor(es): dc.contributorDias, Eliane Pedra-
Autor(es): dc.contributorhttp://lattes.cnpq.br/4383696340593005-
Autor(es): dc.contributorCastro Gamero, Angel Maurício-
Autor(es): dc.contributorhttp://lattes.cnpq.br/8175440685355450-
Autor(es): dc.contributorPetito, Rafael Braga-
Autor(es): dc.contributorhttp://lattes.cnpq.br/6219727602155799-
Autor(es): dc.contributorSilva Júnior, Arley-
Autor(es): dc.contributorhttp://lattes.cnpq.br/9066619136266441-
Autor(es): dc.contributorAugusto, Lívia Maria Mendonça-
Autor(es): dc.contributorhttp://lattes.cnpq.br/5544837622560506-
Autor(es): dc.contributorRocha, Wilker Menezes da-
Autor(es): dc.contributorhttps://lattes.cnpq.br/5492961268999784-
Autor(es): dc.contributorhttp://lattes.cnpq.br/6395525308413347-
Autor(es): dc.creatorDevillart, Talita Alves do Nascimento Santos-
Data de aceite: dc.date.accessioned2024-07-11T17:28:42Z-
Data de disponibilização: dc.date.available2024-07-11T17:28:42Z-
Data de envio: dc.date.issued2022-07-05-
Data de envio: dc.date.issued2022-07-05-
Data de envio: dc.date.issued2021-
Fonte completa do material: dc.identifierhttp://app.uff.br/riuff/handle/1/25571-
Fonte completa do material: dc.identifierhttp;//dx.doi.org/10.22409/PPG-Patologia.2022.d.09828498774-
Fonte: dc.identifier.urihttp://educapes.capes.gov.br/handle/capes/751109-
Descrição: dc.descriptionIntrodução: A proteína Ki-67 é um biomarcador útil para avaliar o índice de proliferação celular, com valor prognóstico e preditivo já descrito para algumas neoplasias. Seus padrões morfológicos de imunorreatividade podem ser associados às fases do ciclo celular, porém a exata localização desta proteína em cada fase do ciclo ainda precisa ser mais detalhada. A análise da expressão de proteínas durante o ciclo pode ser realizada através da imunofluorescência de células cultivadas e sincronizadas. O uso de um método automatizado de citologia em meio líquido associado à imunocitoquímica pode aperfeiçoar a análise dessa expressão, uma vez que permite a visualização de detalhes morfológicos nucleares e da expressão da proteína simultaneamente. Hipótese: A metodologia automatizada de citologia em meio líquido é aplicável para a avaliação da expressão da proteína Ki-67 através da imunocitoquímica e aspectos morfológicos nucleares de fibroblastos cultivados in vitro. Objetivo geral: Comprovar que a utilização da metodologia automatizada de citologia em meio líquido é aplicável à cultura de fibroblastos para avaliação da proteína Ki-67 por imunocitoquímica e aspectos morfológicos nucleares de fibroblastos. Material e Métodos: Fibroblastos ATCC®SCRC-1041™ foram cultivados e sincronizados através do seguinte protocolo duplo de sincronização: na fase G0 por privação de soro e na fase G1/S usando bloqueio único de timidina (2mM) por 16 h. O processamento automatizado em meio líquido foi realizado usando a plataforma Thinprep®. Aspectos citomorfológicos foram avaliados através da coloração Papanicolaou e a expressão da proteína Ki-67 por imunocitoquímica.Em paralelo, foram cultivados fibroblastos sobre lamínulas e avaliada a expressão da proteína Ki-67 por imunofluorescência. Resultados: O processamento automatizado preservou a morfologia celular e aprimorou a análise da expressão da proteína Ki-67. Fibroblastos não privados de soro apresentaram a maioria dos núcleos imunopositivos para Ki-67, com padrões granular puntiforme, granular difuso, nodular e marcação fraca, já as células privadas de soro foram predominantemente negativas (>95%). Nos períodos 6 h e 12 h após reestimulação sérica, observamos os padrões de marcação fraca, nodular e granular puntiforme. Após o tratamento com timidina observamos os padrões granular puntiforme,nodular e granular difuso, com um maior número de células positivas do que nos momentos iniciais após a restituição do soro. Conclusão: O uso da metodologia automatizada de citologia em meio líquido em fibroblastos cultivados in vitro permite avaliar com detalhes os aspectos morfológicos da expressão da proteína Ki-67 por imunocitoquímica e a morfologia celular se corados por Papanicolaou. O protocolo para abordagem por dupla metodologia é adequado para avaliar expressão da proteína Ki-67 por imunofluorescência e imunocitoquímica. Existem padrões diferentes de expressão da proteína Ki-67 em fibroblastos cultivados in vitro, porém não podem ser associados às fases do ciclo celular com a metodologia utilizada-
Descrição: dc.descriptionCoordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior-
Descrição: dc.descriptionIntroduction: Ki-67 protein is a useful biomarker to assess the labeling index proliferation index, with prognostic and predictive value already described for some tumours. Their morphological patterns of immunoreactivity can be associated with the phases of the cell cycle, but an exact location of this precision in each cell cycle phase is still more detailed. Analysis of protein expression during the cycle can be performed by immunofluorescence of cultured and synchronized cells. The method of an automated cytology method associated with immunological use may be able to analyze the expression since it allows a visualization of morphological details and simultaneous protein expression. Hypothesis: An liquid-based cytlology system is applicable for an morphological evaluation of in vitro cultured fIbroblasts and for Ki-67 protein expression through immunocitochemistry. Objective: To prove the use of the technical methodology of chemical cytology applicable to fibroblast culture for nuclear morphological evaluation and analysis of Ki-67 protein expression by immunocitochemistry. Materials and methods: ATCC®SCRC-1041™ fibroblasts were cultured and synchronized using a dual synchronization protocol: in the G0 phase by serum deprivation and in the G1/S phase using thymidine (2 mM). Automated processing in liquid based was performed using the Thinprep® platform. Cytomorphological aspects were evaluated by Papanicolaou staining and Ki-67 protein expression by immunocytochemistry. In parallel, fibroblasts were cultured on coverslips and the expression of Ki-67 protein was evaluated by immunofluorescence. Results: Automated processing preserved cell morphology and improved the analysis of Ki-67 protein expression. Non-serum-deprived fibroblasts showed the majority of nuclei immunopositive for Ki-67, with punctate granular, diffuse granular, nodular and weak staining patterns, whereas serumdeprived cells were predominantly negative (>95%). At 6 h and 12 h after serum restimulation, we observed patterns of weak, nodular and punctate granular labeling. After thymidine treatment, we observed punctate, nodular and diffuse granular patterns, with a greater number of positive cells than in the initial moments after serum restitution. Conclusion: The use of automated liquid-basedcitology in fibroblasts cultured in vitro allows evaluating in detail the morphological aspects of Ki67 protein expression by immunocytochemistry and cell morphology if stained by Papanicolaou. The protocol for the dual methodology approach is suitable for evaluating Ki-67 protein expression by immunofluorescence and immunocytochemistry. There are different patterns of expression of Ki-67 protein in fibroblasts cultured in vitro, but they cannot be associated with cell cycle phases with the methodology used.-
Descrição: dc.description111 p.-
Formato: dc.formatapplication/pdf-
Idioma: dc.languagept_BR-
Direitos: dc.rightsOpen Access-
Direitos: dc.rightsCC-BY-SA-
Palavras-chave: dc.subjectFibroblastos ATCC®SCRC-1041™-
Palavras-chave: dc.subjectCitologia em base líquida-
Palavras-chave: dc.subjectThinprep®-
Palavras-chave: dc.subjectImunofluorescência-
Palavras-chave: dc.subjectKi-67-
Palavras-chave: dc.subjectFibroblasts ATCC®SCRC-1041™-
Palavras-chave: dc.subjectLiquid based citology-
Palavras-chave: dc.subjectThinprep®-
Palavras-chave: dc.subjectImmunofluorescence-
Palavras-chave: dc.subjectImmunocitochemistry-
Palavras-chave: dc.subjectKi-67-
Título: dc.titleInovação do uso da metodologia automatizada de citologia em meio líquido para a avaliação da expressão da proteína ki-67 através da imunocitoquímica e aspectos morfológicos nucleares de fibroblastos cultivados in vitro-
Tipo de arquivo: dc.typeTese-
Aparece nas coleções:Repositório Institucional da Universidade Federal Fluminense - RiUFF

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