Pesquisa do potencial de defesa do modelo experimental invertebrado Galleria mellonella contra o patógeno fúngico Sporothrix brasiliensis

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MetadadosDescriçãoIdioma
Autor(es): dc.contributorBaptista, Andréa Regina de Souza-
Autor(es): dc.contributorhttp://lattes.cnpq.br/9336539785452100-
Autor(es): dc.contributorPenna, Bruno de Araujo-
Autor(es): dc.contributorhttp://lattes.cnpq.br/1215713501500050-
Autor(es): dc.contributorBatista, Ribrio Ivan Tavares Pereira-
Autor(es): dc.contributorhttp://lattes.cnpq.br/1434409628176942-
Autor(es): dc.contributorSilva, Laura Nunes-
Autor(es): dc.contributorhttp://lattes.cnpq.br/4709783118378705-
Autor(es): dc.contributorhttp://lattes.cnpq.br/2376120606984253-
Autor(es): dc.creatorReis, Nathália Faria-
Data de aceite: dc.date.accessioned2024-07-11T17:26:52Z-
Data de disponibilização: dc.date.available2024-07-11T17:26:52Z-
Data de envio: dc.date.issued2024-01-10-
Data de envio: dc.date.issued2024-01-10-
Fonte completa do material: dc.identifierhttp://app.uff.br/riuff/handle/1/31886-
Fonte: dc.identifier.urihttp://educapes.capes.gov.br/handle/capes/750478-
Descrição: dc.descriptionA esporotricose é uma micose subcutânea negligenciada, causada por espécies patogênicas do gênero Sporothrix. É considerada uma afecção hiperendêmica no estado do Rio de Janeiro, no qual a transmissão zoonótica através dos felinos domésticos vem crescendo exponencialmente. Diante desse cenário, a investigação da interação patógeno-hospedeiro é valiosa. Para tal, modelos invertebrados mostraram-se alternativa adequada para avaliar a virulência de fungos patogênicos, uma vez que o sistema imune dos insetos apresenta estreita semelhança à resposta imune inata dos mamíferos. O objetivo deste projeto foi investigar aspectos fenotípicos e moleculares envolvidos na resposta imune inata do hospedeiro invertebrado Galleria mellonella frente à infecção pelo Sporothrix brasiliensis. Para tanto, foram realizadas curvas de sobrevivência após infecção fúngica e avaliados diariamente parâmetros fenotípicos como a densidade das células de defesa do hospedeiro invertebrado (hemócitos) e a evolução da carga fúngica através da contagem das Unidades Formadoras de Colônias (UFC). Além disso, foi efetuada a análise da expressão de genes que codificam peptídeos antimicrobianos com potencial antifúngico (Galleriomicina, Galiomicina) e genes gerenciadores de estresse (C7 Contig 15362 e C8 Contig 1910). Foram utilizadas larvas de G. mellonella, inoculadas com 1x107 leveduras/larva em incubação a 37oC durante dez dias. Nos dias um (D1), cinco (D5) e oito (D8) foi realizada a extração de RNA das larvas, com posterior conversão para DNA complementar e quantificação por Reação em cadeia da polimerase via transcriptase reversa quantitativa (RT- qPCR). Para fins estatísticos foram considerados significantes valores de p<0,05. Como resultado, foi observado que a carga fúngica do patógeno e a densidade dos hemócitos são proporcionalmente crescentes, especialmente a partir do quinto dia de infecção quando também começam as alterações morfológicas deletérias das larvas e a mortalidade (p < 0,001; Kaplan-Meier). Quanto aos dados moleculares, os genes Galleriomicina, C7 Contig 15362 e C8 Contig 19101 foram regulados positivamente (p<0,05) em momentos distintos do processo de infecção (p<0,05), demonstrando um perfil tempo-dependente e alternadamente modulado em resposta aos eventos deletérios ocasionados pelo Sporothrix brasiliensis. Contrariamente, o gene Galiomicina não mostrou diferença significativa entre os grupos experimentais. Este trabalho é inédito ao avaliar a expressão gênica relacionada à defesa do inseto Galleria mellonella em reposta à infecção por um fungo dimórfico. Tendo em face à importante analogia entre a resposta inata da G. mellonella frente à infecção fúngica e às dificuldades terapêuticas inerentes à esporotricose felina, pretende-se contribuir com o futuro levantamento de potenciais vias alternativas relacionadas ao tratamento e consequentemente, o controle da infecção pelo patógeno fúngico.-
Descrição: dc.descriptionCoordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior-
Descrição: dc.descriptionFundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro-
Descrição: dc.descriptionSporotrichosis is a neglected subcutaneous mycosis caused by pathogenic species of the genus Sporothrix. It is considered a hyperendemic disease in the state of Rio de Janeiro, where zoonotic transmission through domestic cats is growing exponentially. In this scenario, the investigation of pathogen-host interaction is valuable. To this purpose, invertebrate models have proven to be a suitable alternative to evaluate the virulence of pathogenic fungi, since the insect immune system is very similar to the mammalian innate immune response. The objective of this project was to investigate phenotypic and molecular aspects involved in the innate immune response of the invertebrate host Galleria mellonella to infection by Sporothrix brasiliensis. To this end, survival curves were performed after fungal infection and daily evaluation of phenotypic parameters such as the density of defense cells of the invertebrate host (hemocytes) and the evolution of the fungal load through the count of Colony Forming Units (CFU). In addition, expression analysis of genes encoding antimicrobial peptides with antifungal potential (Galleriomycin, Galiomycin) and stress managing genes (C7 Contig 15362 and C8 Contig 1910) was performed. G. mellonella larvae were used, inoculated with 1x107 yeast/larvae in incubation at 37°C for ten days. On days one (D1), five (D5) and eight (D8), RNA extraction was performed from the larvae, with later conversion to complementary DNA and quantification by polymerase chain reaction via quantitative reverse transcriptase (RT- qPCR). For statistical analysis, values of p<0.05 were considered significant. As a result, it was observed that the fungal load of the pathogen and the density of hemocytes are proportionally increasing, especially from the fifth day of infection when the deleterious morphological changes of the larvae and mortality also begin (p < 0.001; Kaplan-Meier). As for the molecular data, Galleriomycin, C7 Contig 15362 and C8 Contig 19101 genes were positively regulated (p<0.05) at distinct moments of the infection process (p<0.05), demonstrating a time-dependent and alternately modulated profile in response to the deleterious events caused by Sporothrix brasiliensis. Contrarily, Galiomycin gene showed no significant difference between the experimental groups. This work is a first in evaluating the defense-related gene expression of Galleria mellonella in response to infection by a dimorphic fungus. Given the important analogy between the innate response of G. mellonella to fungal infection and the therapeutic difficulties inherent to feline sporotrichosis, we intend to contribute to the future survey of potential alternative routes related to the treatment and consequently, the control of infection by the fungal pathogen.-
Descrição: dc.description100 f.-
Formato: dc.formatapplication/pdf-
Idioma: dc.languagept_BR-
Direitos: dc.rightsOpen Access-
Direitos: dc.rightsCC-BY-SA-
Palavras-chave: dc.subjectEsporotricose-
Palavras-chave: dc.subjectExpressão Gênica-
Palavras-chave: dc.subjectInvertebrados-
Palavras-chave: dc.subjectPeptídeos antimicrobianos-
Palavras-chave: dc.subjectEsporotricose-
Palavras-chave: dc.subjectExpressão gênica-
Palavras-chave: dc.subjectSporotrichosis-
Palavras-chave: dc.subjectGene Expression-
Palavras-chave: dc.subjectInvertebrates-
Palavras-chave: dc.subjectAntimicrobial Peptides-
Título: dc.titlePesquisa do potencial de defesa do modelo experimental invertebrado Galleria mellonella contra o patógeno fúngico Sporothrix brasiliensis-
Tipo de arquivo: dc.typeDissertação-
Aparece nas coleções:Repositório Institucional da Universidade Federal Fluminense - RiUFF

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