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Avaliação de testes sorológicos para leishmaniose visceral canina utilizando coleta de amostra sanguíneas em papel de filtro

Use este link compartilhar ou citar este material: http://educapes.capes.gov.br/handle/capes/555833
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MetadadosDescriçãoIdioma
Autor(es): dc.contributorCoelho, George Luiz Lins Machado-
Autor(es): dc.creatorSilva, Marcus Vinícius da-
Data de aceite: dc.date.accessioned2019-11-06T13:27:42Z-
Data de disponibilização: dc.date.available2019-11-06T13:27:42Z-
Data de envio: dc.date.issued2013-04-02-
Data de envio: dc.date.issued2013-04-02-
Data de envio: dc.date.issued2005-
Fonte completa do material: dc.identifierhttp://hdl.handle.net/123456789/2692-
Fonte: dc.identifier.urihttp://educapes.capes.gov.br/handle/capes/555833-
Descrição: dc.descriptionA leishmaniose visceral vem apresentando mudanças importantes em seu padrão de transmissão, com progressiva urbanização e expansão geográfica, acometendo regiões anteriormente consideradas indenes. O controle da doença tem se mostrado difícil e laborioso, e a experiência adquirida nas últimas décadas revela a necessidade de se utilizar as medidas de controle de forma integrada. Incluída entre as estratégias preconizadas pelos órgãos públicos, a eliminação dos reservatórios caninos constitui uma importante ação que, para ser executada, exige uma correta identificação dos cães infectados. Outras medidas, como a vacinação dos cães, têm sido também utilizadas. Com a introdução no mercado de uma vacina contra a Leishmaniose Visceral Canina (Leishmuneâ), capaz de ocasionar o desenvolvimento de altos níveis de anticorpos IgG, torna-se necessária a utilização de novos marcadores sorológicos. Além disso, para o diagnóstico sorológico da infecção por Leishmania chagasi, é desejável a utilização de sangue dessecado em papel de filtro (SDPF), pois apresenta vantagens sobre a utilização de soro obtido por punção venosa, principalmente com relação aos custos envolvidos com logística e às facilidades para utilização em condições de campo. Assim, neste trabalho, buscou-se validar, em amostras de soro e de SDPF, um teste de imunofluorescência indireta (IFI), desenvolvido pela Bio-Manguinhos, e dois testes imunoenzimáticos (ELISA), sendo um deles também desenvolvido pela Bio-Manguinhos e o outro desenvolvido de acordo com a técnica descrita por Voller (1976) com modificações, utilizando antígeno solúvel obtido a partir de promastigotas de L. major-like. Avaliou-se também a reprodutibilidade dos níveis de anticorpos IgG, IgG1 e IgG2 por estas reações sorológicas, ao longo do tempo decorrido após a coleta. Além disso, determinou-se a capacidade das imunoglobulinas IgG1 e IgG2 de se constituírem em marcadores de infecção ativa por L. chagasi e o comportamento das mesmas em amostras de SDPF. As amostras de soro e eluato de SDPF obtidas de 161 cães – sendo 31 negativos, 10 chagásicos, 42 infectados assintomáticos, 45 infectados oligossintomáticos e 33 infectados polissintomáticos – foram ensaiadas de forma pareada no 1o dia após a coleta (D.A.C.), sendo que no 15o, 30o e 60o D.A.C. foram ensaiadas alíquotas de amostras de eluato de SDPF e comparadas com os resultados obtidos com o soro no 1º D.A.C. A validade das reações, em soro e em eluato, foi aferida através dos índices de copositividade (icp), co-negatividade (icn), concordância de Youden (J) e dos valores preditivos positivo (vpp) e negativo (vpn), utilizando-se a reação de IFI em soros como referência, uma vez que esta reação demonstrou fidelidade em identificar corretamente os animais verdadeiramente positivos e negativos. As reações de IFI, ELISA (Bio- Manguinhos), ELISA IgG (ag. L. major-like) e ELISA IgG2 (ag. L. major-like), em amostras de soro e eluato, se mostraram válidas para o diagnóstico sorológico da LVC. A distribuição cruzada dos resultados obtidos com soro e eluato, para cada reação avaliada, revelou ótimas e boas concordâncias para as reações de IFI, ELISA (Bio-Manguinhos), ELISA IgG (ag. L. major-like) e ELISA IgG2 (ag. L. major-like). A análise da reprodutibilidade das reações em SDPF, armazenadas a 4ºC na presença de sílica-gel., em função do tempo, demonstrou que níveis de imunoglobulinas específicas da classe IgG, presentes nas amostras de SDPF, mantiveram-se estáveis por até 30 D.A.C. pela reação de IFI e por até 60 D.A.C. pelas reações de ELISA (Bio-Manguinhos) e ELISA (ag. L. majorlike). As imunoglobulinas específicas das subclasses IgG1 e IgG2, presentes nas amostras de SDPF, também mantiveram seus níveis estáveis por até 60 D.A.C. pela reação de ELISA (ag. L. major-like). Não foi possível estabelecer uma correlação entre os níveis da imunoglobulinas IgG, IgG1 e IgG2 com a classificação clínica dos cães infectados por L. chagasi. _________________________________________________________________________________________-
Descrição: dc.descriptionABSTRACT: Visceral Leishmaniasis comes presenting important changes in its standard of transmission, with gradual urbanization and geographic expansion, attacking undamaged considered regions previously. The control of the illness if has shown difficult and laborious, e the experience acquired in the last decades discloses the necessity of if using the measures of control of integrated form. Enclosed it enters the strategies praised for the public agencies, the elimination of the canine reservoirs constitutes an important action that, to be executed, it demands a correct identification of the dogs with infection. Other measures, as the vaccination of the dogs, they have been also used. With the introduction in the market of a vaccine against the Canine Visceral Leishmaniasis (Leishmune®), capable to cause the development of high levels of IgG antibodies, the use of new serological markers becomes necessary. Moreover, for the serodiagnosis of the infection for Leishmania chagasi, the use of blood desiccated in filter paper (SDPF) is desirable, therefore it presents advantages on the use of serum gotten for venopuncture, mainly with relation to the involved costs with logistic and the easinesses for use in field conditions. Thus, in this work, one searched to validate, in samples of serum and SDPF, one has tested of indirect fluorescence antibody (IFA), developed for the Bio-Manguinhos, e two enzyme linked immunosorbent assay (ELISA), being one of them also developed by the Bio-Manguinhos and the other developed in accordance with the described technique for Voller (1976) with modifications, using dissolvable antigen gotten from promastigotas of L. major-like. The reproducibility of the levels of antibodies IgG, IgG1 and IgG2 was also evaluated, for these serological reactions, to long of the passed time after the collection. Moreover, it was determined capacity of the antibodies IgG1 and IgG2 of if constituting in markers of active infection of L. chagasi and their behavior in samples of SDPF. The samples of serum and eluates of SDPF gotten of 161 dogs - being 31 negatives, 10 with Trypanosoma cruzi infection, 42 asymptomatic, 45 oligosymptomatic and 33 polisymptomatic for L. chagasi infection - they had been assayed in duplicate in the 1º day after collection (D.A.C.), being that in 15º, 30º and 60º D.A.C. they had been assayed aliquot of samples of eluates of SDPF and compared with the results gotten with the serum in 1º D.A.C. The validity of the reactions, in serum and eluates, it was surveyed through the indices of the co-positivity (icp), co-negativity (icn), agreement of Youden (j) and the preditivos values positive (vpp) and negative (vpn), using it reaction of IFA in serum as reference, a time that this reaction demonstrated allegiance in identifying the truily positive and negative animals correctly. The IFA, ELISA (Bio-Manguinhos), ELISA IgG (Ag. L. major-like) and ELISA IgG2 (Ag. L. major-like), in samples of serum and eluates, if they had shown valid for the serodiagnosis of the LVC. The crossed distribution of the results gotten with serum and eluates, for each evaluated reaction, it disclosed and good agreements for the IFI reactions excellent, ELISA (Bio-Manguinhos), ELISA IgG (Ag. L. major-like) and ELISA IgG2 (Ag. L. major-like). The analysis of the reproducibility of the reactions in SDPF, stored 4ºC with silica-gel, in function of the time, it demonstrated that levels of specific antibodies IgG, gifts in the samples of SDPF, they had been remained steady for up to 30 D.A.C. for the reaction of IFI and up to 60 D.A.C. for the reactions of ELISA (Bio-Manguinhos) and ELISA (Ag. L. major-like). The specific antibodies of the subclasses IgG1 and IgG2, gifts in the samples of SDPF, also they had kept its steady levels for up to 60 D.A.C. for the reaction of ELISA (Ag. L. major-like). It was not possible to establish a correlation enters the levels of the antibodies IgG, IgG1 and IgG2 with the clinical classification of the dogs with L. chagasi infection.-
Idioma: dc.languagept_BR-
Publicador: dc.publisherPrograma de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto.-
Palavras-chave: dc.subjectLeishmaniose visceral-
Palavras-chave: dc.subjectParasitologia-
Palavras-chave: dc.subjectSorologia-
Palavras-chave: dc.subjectImunologia de protozoários-
Título: dc.titleAvaliação de testes sorológicos para leishmaniose visceral canina utilizando coleta de amostra sanguíneas em papel de filtro-
Tipo de arquivo: dc.typelivro digital-
Aparece nas coleções:Repositório Institucional - UFOP

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