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| Metadados | Descrição | Idioma |
|---|---|---|
| Autor(es): dc.contributor | Figueira , Antonia dos Reis | - |
| Autor(es): dc.contributor | Ramalho, Thaís Oliveira | - |
| Autor(es): dc.contributor | Perina, Fabiano Jose | - |
| Autor(es): dc.contributor | Souza, Ricardo Magela de | - |
| Autor(es): dc.contributor | Alves, Eduardo | - |
| Autor(es): dc.creator | Núñes, Andrés Mauricio Pinzón | - |
| Data de aceite: dc.date.accessioned | 2026-02-09T12:13:56Z | - |
| Data de disponibilização: dc.date.available | 2026-02-09T12:13:56Z | - |
| Data de envio: dc.date.issued | 2019-07-22 | - |
| Data de envio: dc.date.issued | 2019-07-22 | - |
| Data de envio: dc.date.issued | 2019-07-22 | - |
| Data de envio: dc.date.issued | 2019-06-09 | - |
| Fonte completa do material: dc.identifier | https://repositorio.ufla.br/handle/1/35508 | - |
| Fonte: dc.identifier.uri | http://educapes.capes.gov.br/handle/capes/1157129 | - |
| Descrição: dc.description | Soybean yellow shoot virus (SoyYSV) has a high potential for severe crop destruction and is a threat to soybean production in Brazil. Recently, SoyYSV was sequenced and molecular analyzes indicated that it is a new species belonging to the Potyviridae family. Therefore, it is important to understand the subcellular location of the viral proteins in the host cell and its possible silencing suppression activity to understand the molecular mechanisms involved in viral infection processes. For this, the genes coding for the SoyYSV viral proteins named P1, HCPro, P3, PIPO, 6K1, NIa, NIb and CP, were cloned into the entry clone plasmid of the Gateway system (PDONR221). After cloning, it was subcloned into the pSITE expression vector fused to the GFP fluorescence protein and expressed by Agrobacterium tumefasciens, in two lines of Nicotiana benthamiana transgenic plants expressing the RFP fluorescent protein, one of these fused to histone 2b, inducing fluorescence in the nucleus, and the other one with protein expressed in the endoplasmic reticulum. The analysis of the infiltrated plants, coupled with observations of confocal microscopy, showed that the proteins P1, HCPro and Nia were located in the nucleus and cytoplasm; P3 and Nib accumulated in the cytoplasm, nucleus and nucleolus, whereas the PIPO and 6K1 proteins were located in the cell membranes in the cytoplasm. The CP protein accumulated exclusively in the nuclear periphery. On the other hand, in the second experiment, the objective was to investigate the possible silencing suppression activity presented by some proteins of Soybean yellow shoot virus (SoyYSV), Turnip mosaic virus (TUMV), Chinese yan necrotic mosaic virus (CYNMV), Blackberry virus Y (BlVY) Arepa palm necrotic ringspot virus (APNRV) and Brome streak mosaic virus (BSTMV), belonging to the Potyviridae family. For this, an infectious clone of Plum pox virus (PPV) was used, inserting the genes encoding the proteins of interest. The constructs were expressed in Nicotiana benthamiana plants by Agrobacterium tumefasciens. The images were obtained by epifluorescence microscopy and fluorescence quantification using fluorometry. The results obtained in this work did not show silencing suppression activity, but allowed to obtain information that contributed to a better understanding of the silencing mechanisms of SoyYSV in the infection process. Further studies should be done by knowing the role of viral proteins when they are associated with virus proteins or when interacting specifically with host proteins. | - |
| Descrição: dc.description | Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) | - |
| Descrição: dc.description | O vírus do amarelo do broto da soja (Soybean yellow shoot virus-SoyYSV) tem alto potencial de causar danos severos às lavouras, representando uma ameaça à produção de soja no Brasil. Recentemente, o SoyYSV foi sequenciado e os análises moleculares indicaram que se trata de uma nova espécie pertencente à famila Potyviridae. Assim sendo, para o entendimento dos mecanismos moleculares que envolvem os processos de infecção viral é importante conhecer a localização subcelular das proteínas virais na célula hospedeira e a sua possível actividade de supressão de silencimento gênico. Para atender a essas demandas, os genes que codificam as proteínas virais do SoyYSV denominadas P1, HCPro, P3, PIPO, 6K1, NIa, NIb e CP, foram clonadas no plasmídeo “entry clone” do sistema Gateway (PDONR221). Após a clonagem, foi subclonado no vetor de expressão pSITE fusionado à proteína fluorescente GFP e expressadas via Agrobacterium tumefasciens em duas linhagens de plantas transgenicas de Nicotiana benthamiana que expressam a proteína fluorescente RFP, sendo que uma delas expressa na histona 2b no núcleo e a outra no retículo endoplasmático. A análise das plantas infiltradas, acoplada a observações de microscopia confocal, mostrou que as proteínas P1, HCPro e Nia se localizaram no núcleo e no citoplasma; as proteínas P3 e Nib se acomularam no citoplasma, núcleo e nucléolo; enquanto que as proteínas PIPO e 6K1 se localizaram nas membranas celulares, no citoplasma. A proteína CP acumulou-se exclusivamente na periferia nuclear. Por outra parte, no segundo experimento, o objetivo foi investigar a possível capacidade de supressão do silenciamento gênico apresentada por algumas proteínas dos vírus: Soybean yellow shoot virus (SoyYSV), Turnip mosaic virus (TUMV), Chinese yan necrotic mosaic virus (CYNMV), Blackberry virus Y (BlVY) Arepa palm necrotic ringspot virus (APNRV), e Brome streak mosaic virus (BSTMV), todos pertencentes à familia Potyviridae. Para isso, utilizamos um clone infeccioso do Plum pox virus (PPV) inserindo os genes que codificam as proteínas de interesse. As construções foram expressas em plantas de Nicotiana benthamiana via Agrobacterium tumefasciens. As imagens foram obtivas mediante microscopia de epifluorescência e as quantificações de fluorescência mediante fluorometria. Os resultados obtidos nesse trabalho não evidenciaram atividade de supressão de silenciamento das proteínas testadas, mas permitiram obter informações que contribuiram para a melhor compreensão dos mecanismos de silenciamento do SoyYSV no processo de infecção. Novos estudos deverão ser feitos vizando conhecer o papel que desempenham as proteínas virais quando estas estão associadas a proteínas do vírus ou quando interagem especificamente com proteínas do hospedeiro. | - |
| Formato: dc.format | application/pdf | - |
| Idioma: dc.language | pt_BR | - |
| Publicador: dc.publisher | Universidade Federal de Lavras | - |
| Publicador: dc.publisher | Departamento de Fitopatologia | - |
| Publicador: dc.publisher | UFLA | - |
| Publicador: dc.publisher | brasil | - |
| Publicador: dc.publisher | Departamento de Fitopatologia | - |
| Publicador: dc.publisher | Escola de Ciências Agrárias de Lavras ( ESAL) | - |
| Direitos: dc.rights | acesso aberto | - |
| Palavras-chave: dc.subject | Clonagem | - |
| Palavras-chave: dc.subject | Interação planta-patógeno | - |
| Palavras-chave: dc.subject | Virologia molecular | - |
| Palavras-chave: dc.subject | Clonation | - |
| Palavras-chave: dc.subject | Plant pathogen interaction | - |
| Palavras-chave: dc.subject | Molecular virology | - |
| Palavras-chave: dc.subject | Ciências Agrárias | - |
| Título: dc.title | Expression, subcellular localization and estudies on silencing suppression of a new member of the potyviridae family in Brazil | - |
| Tipo de arquivo: dc.type | tese | - |
| Aparece nas coleções: | Repositório Institucional da Universidade Federal de Lavras (RIUFLA) | |
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