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Metadados | Descrição | Idioma |
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Autor(es): dc.contributor | Araujo, Elizabeth Giestal de | - |
Autor(es): dc.contributor | http://lattes.cnpq.br/8230334072312477 | - |
Autor(es): dc.contributor | Ventura, Ana Lúcia Marques | - |
Autor(es): dc.contributor | http://lattes.cnpq.br/8566893832329138 | - |
Autor(es): dc.contributor | Dezonne, Rômulo Sperduto | - |
Autor(es): dc.contributor | http://lattes.cnpq.br/5571081790485114 | - |
Autor(es): dc.contributor | Granja, Marcelo Gomes | - |
Autor(es): dc.contributor | http://lattes.cnpq.br/6693615022674151 | - |
Autor(es): dc.contributor | Bomfim, Priscilla Oliveira Silva | - |
Autor(es): dc.contributor | http://lattes.cnpq.br/3674929797286865 | - |
Autor(es): dc.contributor | http://lattes.cnpq.br/4047871861217055 | - |
Autor(es): dc.creator | Figueiredo, Camila Saggioro de | - |
Data de aceite: dc.date.accessioned | 2025-08-21T20:13:59Z | - |
Data de disponibilização: dc.date.available | 2025-08-21T20:13:59Z | - |
Data de envio: dc.date.issued | 2025-03-17 | - |
Data de envio: dc.date.issued | 2025-03-17 | - |
Fonte completa do material: dc.identifier | https://app.uff.br/riuff/handle/1/37232 | - |
Fonte: dc.identifier.uri | http://educapes.capes.gov.br/handle/capes/1057211 | - |
Descrição: dc.description | A perda de visão em doenças retinianas frequentemente decorre da degeneração das células ganglionares da retina (CGRs), responsáveis pela transmissão de informações visuais ao cérebro. Até o momento, a busca por tratamentos farmacológicos eficazes para prevenir a morte dessas células tem sido um desafio. Estudos anteriores destacaram os efeitos neuroprotetores da ouabaína, um ligante da Na+/K+ATPase, e das interleucinas (IL)-2 e IL-10 em CGRs submetidas à axotomia. Contudo, os mecanismos subjacentes aos efeitos da ouabaína ainda são pouco compreendidos. Nossa hipótese foi que os efeitos neuroprotetores da ouabaína na retina são mediados por um mecanismo dependente da síntese e sinalização de IL-2 e IL-10. Utilizamos culturas primárias de retina de ratos, submetendo-as a diferentes tratamentos, incluindo ouabaína e/ou anticorpos para IL-10 ou IL-2, inibidores da síntese proteica, do transporte vesicular, e da metaloprotease-9 (MMP-9), por diferentes períodos. Para avaliar a sobrevivência das células após a axotomia do nervo óptico, as CGRs foram marcadas in vivo com peroxidase (HRP), e análises quantitativas da sobrevivência das CGRs foram realizadas após tratamento in vitro com ouabaína e/ou anticorpos para IL-10 ou IL-2 por 48 horas. Avaliamos os níveis de expressão da IL-10, IL-2 e receptores de IL-2 por Western Blotting (WB). Para identificar os tipos celulares expressando IL-2/IL-10, realizamos dupla marcação por imunofluorescência para IL-2 ou IL-10 e Brn3a, um marcador de CGRs. Realizamos análises de bulk RNA-Seq em culturas tratadas ou não com ouabaína por 24 horas. Por fim, avaliamos também as vias de síntese proteica. Nossos resultados indicam que a ouabaína influencia a síntese e liberação temporal de IL-2 e IL-10, além de modular a expressão do receptor da IL-2 nas células da retina. A ouabaína induziu a clivagem do receptor de IL-2 de maneira dependente da MMP-9. Demonstramos que cerca de 50% das CGRs positivas para Brn3a também são positivas para IL-2 ou IL-10, e que a ouabaína modula a expressão destas citocinas. Além disso, o tratamento com ouabaína impediu a morte de CGRs axotomizadas por mecanismos dependentes de IL-2/IL-10 e regulação da síntese proteica. Através das análises de RNA-Seq e do ensaio de SUnSET, demonstramos que a ouabaína induz a expressão de genes associados à tradução de RNAm e aumenta rapidamente a síntese de proteínas nas células da retina. Em resumo, a ouabaína regula a sinalização de IL-2/IL-10 na retina e a síntese proteica, desempenhando um papel crucial na restauração da homeostase celular e proteção das CGRs após a axotomia do nervo óptico. | - |
Descrição: dc.description | Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior. | - |
Descrição: dc.description | Vision loss in retinal diseases often results from the degeneration of retinal ganglion cells (RGCs), responsible for transmitting visual information to the brain. So far, the search for effective pharmacological treatments to prevent the death of these cells has been challenging. Previous studies have highlighted the neuroprotective effects of ouabain, a Na+/K+ATPase ligand, and interleukins (IL)-2 and IL-10 on axotomized RGCs. However, the mechanisms underlying ouabain's effects are still poorly understood. Our hypothesis was that the neuroprotective effects of ouabain in the retina are mediated by a mechanism dependent on the synthesis and signaling of IL-2 and IL-10. We used primary rat retinal cultures, subjecting them to various treatments, including ouabain and/or antibodies for IL-10 or IL-2, inhibitors of protein synthesis, vesicular transport and metalloproteinase-9 (MMP-9, over different periods. To assess cell survival after optic nerve axotomy, RGCs were in vivo labeled with horseradish peroxidase (HRP), and quantitative analyses of RGC survival were performed after in vitro treatment with ouabain and/or antibodies for IL-10 or IL-2 for 48 hours. We evaluated IL-10, IL-2, and/or IL-2 receptor levels through Western Blotting (WB). To identify cell types expressing IL-2/IL-10, we performed double immunofluorescence labeling for IL-2/IL-10 and Brn3a, an RGC marker. Bulk RNA-Seq analyses were conducted on cultures treated or untreated with ouabain for 24 hours. Finally, protein synthesis pathways were also assessed by WB. Our results indicate that ouabain influences the synthesis and temporal release of IL-2 and IL-10, along with their receptor levels in retinal cells. Ouabain induced IL-2 receptor cleavage in an MMP-9-dependent manner. We demonstrated that about 50% of Brn3a-positive RGCs are also positive for IL-2 or IL-10, which is modulated by ouabain. Moreover, ouabain treatment prevented the death of axotomized HRP-labelled RGCs through IL-2/IL-10-dependent mechanisms and protein synthesis. Through RNA-Seq analyses and the SUnSET assay, we showed that ouabain induces the expression of genes associated with mRNA translation and rapidly increases protein synthesis in retinal cells. In summary, ouabain regulates IL-2/IL-10 signaling in the retina and protein synthesis, playing a crucial role in restoring cellular homeostasis and protecting RGCs after optic nerve axotomy. | - |
Descrição: dc.description | 409 f. | - |
Formato: dc.format | application/pdf | - |
Idioma: dc.language | pt_BR | - |
Direitos: dc.rights | Open Access | - |
Direitos: dc.rights | CC-BY-SA | - |
Palavras-chave: dc.subject | Ouabaína | - |
Palavras-chave: dc.subject | Na+/K+ ATPase | - |
Palavras-chave: dc.subject | Interleucina-2 | - |
Palavras-chave: dc.subject | Interleucina-10 | - |
Palavras-chave: dc.subject | Retina | - |
Palavras-chave: dc.subject | Fármacos Neuroprotectores | - |
Palavras-chave: dc.subject | Células Ganglionares da Retina | - |
Palavras-chave: dc.subject | Efeitos dos fármacos | - |
Palavras-chave: dc.subject | Ouabain | - |
Palavras-chave: dc.subject | Na+/K+ ATPase | - |
Palavras-chave: dc.subject | Interleukin 2 | - |
Palavras-chave: dc.subject | Interleukin 10 | - |
Título: dc.title | OUABAÍNA INDUZ NEUROPROTEÇÃO EM CÉLULAS DA RETINA: PAPEL DAS INTERLEUCINAS 2 E 10 | - |
Título: dc.title | OUABAIN INDUCES NEUROPROTECTION IN RETINAL CELLS: ROLE OF INTERLEUKINS 2 AND 10 | - |
Tipo de arquivo: dc.type | Tese | - |
Aparece nas coleções: | Repositório Institucional da Universidade Federal Fluminense - RiUFF |
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