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Metadados | Descrição | Idioma |
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Autor(es): dc.contributor | Canto, Fábio Barrozo do | - |
Autor(es): dc.contributor | http://lattes.cnpq.br/5819793348966514 | - |
Autor(es): dc.contributor | Alves, Isabella Nogueira da Silva | - |
Autor(es): dc.contributor | http://lattes.cnpq.br/1312577950141972 | - |
Autor(es): dc.contributor | Monteiro, Ana Carolina dos Santos | - |
Autor(es): dc.contributor | http://lattes.cnpq.br/8713786253014379 | - |
Autor(es): dc.contributor | Vale, André Macedo | - |
Autor(es): dc.contributor | http://lattes.cnpq.br/3556861172644653 | - |
Autor(es): dc.contributor | Lima, Juliana Echevarria Neves de | - |
Autor(es): dc.contributor | http://lattes.cnpq.br/7914623918450915 | - |
Autor(es): dc.contributor | Vidal, Vinícius Mendes | - |
Autor(es): dc.contributor | http://lattes.cnpq.br/2214884453003741 | - |
Autor(es): dc.contributor | http://lattes.cnpq.br/5294442750402802 | - |
Autor(es): dc.creator | Marcondes, Yasmim Lemle | - |
Data de aceite: dc.date.accessioned | 2025-08-21T20:11:37Z | - |
Data de disponibilização: dc.date.available | 2025-08-21T20:11:37Z | - |
Data de envio: dc.date.issued | 2025-02-21 | - |
Data de envio: dc.date.issued | 2025-02-21 | - |
Fonte completa do material: dc.identifier | https://app.uff.br/riuff/handle/1/36814 | - |
Fonte: dc.identifier.uri | http://educapes.capes.gov.br/handle/capes/1056309 | - |
Descrição: dc.description | Os linfócitos B são conhecidos especialmente pela produção e secreção de imunoglobulinas. No entanto, sabe-se que esta população celular também desempenha papel crítico na homeostase imunitária do indivíduo por meio da liberação TLR/MyD88-dependente de citocinas imunomodulatórias, como interleucina-10 e interleucina-6 (IL-6). De maneira importante, foi demonstrado que a IL-6 secretada por linfócitos B exerce funções biológicas em contextos homeostático e patológico. Uma vez que linfócitos B produzem IL-6 em resposta a moléculas microbianas, tais como lipopolissacarídeo (LPS) e CpG, o presente estudo teve como objetivo central investigar se a estimulação homeostática dessa população celular por padrões moleculares conservados evolutivamente entre bactérias da microbiota intestinal (e sinalizados por via TLR/MyD88-dependente) influenciaria seu potencial de expressar IL-6. Com este propósito, leucócitos totais ou linfócitos B purificados de órgãos linfoides anatomicamente associados (linfonodos mesentéricos, mLN) ou não (baço e linfonodos extraintestinais, eLN) ao intestino de camundongos C57BL/6 foram inicialmente cultivados por 72 horas sob estímulo in vitro de LPS e, então, as frequências e números absolutos de linfócitos B IL-6+ (bem como seu estado de ativação celular) foram determinados por citometria de fluxo; além disso, secreção de IL-6 foi quantificada nos sobrenadantes dos cultivos por ELISA. Nossos resultados demonstraram que maiores níveis de IL-6 foram secretados por leucócitos esplênicos quando comparados aos provenientes dos mLN, fenômeno explicado pela elevada frequência de células B IL-6+. De maneira importante, este contraste não foi justificado por ativação insuficiente dos leucócitos mesentéricos em comparação aos esplênicos. Adicionalmente, observamos a permanência da diferença previamente descrita em cultivos de linfócitos B purificados do baço e dos mLN, indicando contribuição da natureza intrínseca dessa população na produção diferencial de IL-6 em órgãos linfoides relacionados ou não à mucosa intestinal. Esta análise permitiu, ainda, identificar que a IL-6 é majoritariamente produzida por plasmócitos/plasmoblastos CD138+, população muito mais abundante entre os leucócitos esplênicos. Uma vez que demonstramos que as células B dos mLN produzem menos IL-6 do que as dos eLN após a estimulação com LPS, investigamos a hipótese de que a microbiota intestinal exerceria potencial extrínseco inibitório sobre a expressão de IL-6 por linfócitos CD19+. Para isto, camundongos foram tratados, a partir do 21o dia de vida, com um coquetel de antibióticos de amplo espectro (vancomicina, metronidazol, neomicina e ampicilina, VMNA) por 28 dias consecutivos. Em seguida, leucócitos totais foram isolados do baço e dos mLN de doadores tratados ou não com VMNA e cultivados in vitro conforme descrito anteriormente. Surpreendentemente, observamos a diminuição do percentual de linfócitos B IL-6+ tanto nos leucócitos provenientes do baço quanto dos mLN isolados do grupo tratado. Como, apesar da depleção da microbiota, a produção de IL-6 permaneceu distinta entre os dois órgãos, nos questionamos se fatores extrínsecos aos linfócitos B, mas inerentes a cada sítio anatômico – tais como as células T reguladoras CD4+Foxp3+ (TREG) -, influenciariam o fenômeno observado. Purificamos, então, esta população de ambos os sítios anatômicos de camundongos transgênicos C57BL/6.Foxp3GFP e as co-cultivamos com leucócitos do baço ou dos mLN previamente depletados de células Foxp3+ sob estímulo com LPS. Como resultado, descobrimos que os linfócitos B esplênicos estão sujeitos à supressão subótima da produção de IL-6 pela população TREG local, ao passo que células CD19+ dos mLN não tem sua diferenciação ao perfil IL-6+ afetada por quaisquer das TREG testadas. Coletivamente, o presente estudo demonstra que a produção de IL-6 por linfócitos B em resposta a estímulo TLR/MyD88-dependente propiciado por padrão molecular bacteriano conservado evolutivamente é regulada por meio de fatores linfócito B-intrínsecos e -extrínsecos inerentes a órgãos linfoides secundários associados ou não ao intestino. | - |
Descrição: dc.description | B lymphocytes are best known for their production and secretion of immunoglobulins. However, this cell population is also known to play a critical role in the individual immune homeostasis through the TLR/MyD88-dependent release of immunomodulatory cytokines, such as interleukin-10 and interleukin-6 (IL-6). Importantly, IL-6 secreted by B lymphocytes has been shown to exert biological functions in both homeostatic and pathological contexts. Since B lymphocytes produce IL-6 in response to microbial molecules, such as lipopolysaccharide (LPS) and CpG, the present study aimed to investigate whether homeostatic stimulation of this cell population by evolutionarily conserved microbial patterns from the gut microbiota (and signalling through the TLR/MyD88 pathway) would influence its potential to express IL-6. To this end, total leukocytes or purified B lymphocytes from anatomically associated (mesenteric lymph nodes, mLN) or non-associated (spleen and extra-intestinal lymph nodes, eLN) lymphoid organs of C57BL/6 mice were first cultured for 72 hours under in vitro stimulation with LPS, and the frequencies and absolute numbers of IL-6+ B lymphocytes (as well as their activation state) were determined by flow cytometry. In addition, IL-6 secretion in the supernatants of the cultures was quantified by ELISA. Our results showed that higher levels of IL-6 were secreted by splenic leukocytes compared to those from the mLN, a phenomenon explained by the high frequency of IL-6+ B cells. Importantly, this difference was not due to insufficient activation of mesenteric compared to splenic leukocytes. In addition, we observed that the previously described difference persisted in cultures of purified B lymphocytes from the spleen and mLN, suggesting an intrinsic contribution of this population to the differential production of IL-6 in lymphoid organs associated with or independent of the gut mucosa. This analysis also allowed us to identify that IL-6 is predominantly produced by CD138+ plasma cells/plasmablasts, a population that is much more abundant among splenic leukocytes. Since we have shown that mLN B cells produce less IL-6 than eLN B cells after LPS stimulation, we hypothesised that the gut microbiota might exert an extrinsic inhibitory effect on IL-6 expression by CD19+ lymphocytes. To test this, mice were treated with a broad-spectrum antibiotic cocktail (vancomycin, metronidazole, neomycin and ampicillin, VMNA) from day 21 of life for 28 consecutive days. Subsequently, total leukocytes were isolated from the spleen and mLN of treated or untreated donors and cultured in vitro as described previously. Surprisingly, we observed a reduction in the percentage of IL-6+ B lymphocytes in both spleen and mLN leukocytes from the treated group. As IL-6 production remained distinct between the two organs despite microbiota depletion, we questioned whether factors extrinsic to B lymphocytes but specific to each anatomical site - such as CD4+Foxp3+ regulatory T cells (TREG) - might influence the observed phenomenon. We then purified this population from both anatomical sites and co-cultured it with spleen or mLN leukocytes depleted of Foxp3+ cells under LPS stimulation. As a result, we found that splenic B lymphocytes are subject to suboptimal suppression of IL-6 production by the local TREG population, whereas CD19+ cells from mLN were not affected in their differentiation towards the IL-6+ profile by any of the TREG populations tested. In conclusion, the present study demonstrates that IL-6 production by B lymphocytes in response to TLR/MyD88-dependent stimulation mediated by evolutionarily conserved bacterial molecular patterns is regulated by both intrinsic and extrinsic factors specific to secondary lymphoid organs associated with or independent of the gut. | - |
Descrição: dc.description | 103 f. | - |
Formato: dc.format | application/pdf | - |
Idioma: dc.language | pt_BR | - |
Direitos: dc.rights | Open Access | - |
Direitos: dc.rights | CC-BY-SA | - |
Palavras-chave: dc.subject | linfócito B | - |
Palavras-chave: dc.subject | Interleucina-6 | - |
Palavras-chave: dc.subject | Homeostase periférica | - |
Palavras-chave: dc.subject | Microbiota intestinal | - |
Palavras-chave: dc.subject | Células T reguladoras CD4+Foxp3+ | - |
Palavras-chave: dc.subject | Imunorregulação | - |
Palavras-chave: dc.subject | Imunologia | - |
Palavras-chave: dc.subject | B lymphocyte | - |
Palavras-chave: dc.subject | Interleukin-6 | - |
Palavras-chave: dc.subject | Peripheral homeostasis | - |
Palavras-chave: dc.subject | Intestinal microbiota | - |
Palavras-chave: dc.subject | CD4+Foxp3+ regulatory T cells | - |
Palavras-chave: dc.subject | Immunoregulation | - |
Título: dc.title | PAPEL DE FATORES INTRÍNSECOS E EXTRÍNSECOS NA PRODUÇÃO IN VITRO DA INTERLEUCINA-6 INDUZIDA POR LIPOPOLISSACARÍDEO BACTERIANO A PARTIR DE LINFÓCITOS B ISOLADOS DE CAMUNDONGOS C57BL/6 SOB CONDIÇÃO HOMEOSTÁTICA | - |
Tipo de arquivo: dc.type | Trabalho de conclusão de curso | - |
Aparece nas coleções: | Repositório Institucional da Universidade Federal Fluminense - RiUFF |
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