Produção recombinante do precursor de ubiquitina UBB (tetra ubiquitina) e seu uso como substrato em ensaio de deubiquitinase

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MetadadosDescriçãoIdioma
Autor(es): dc.contributorZanata, Silvio Marques, 1974--
Autor(es): dc.contributorBueno, Mariane Pagno de Souza, 1999--
Autor(es): dc.contributorUniversidade Federal do Paraná. Setor de Ciências Biológicas. Curso de Graduação em Biomedicina-
Autor(es): dc.creatorSouza, Kelly Carolina Sarmento de-
Data de aceite: dc.date.accessioned2025-09-01T10:39:59Z-
Data de disponibilização: dc.date.available2025-09-01T10:39:59Z-
Data de envio: dc.date.issued2024-10-23-
Data de envio: dc.date.issued2024-10-23-
Data de envio: dc.date.issued2023-
Fonte completa do material: dc.identifierhttps://hdl.handle.net/1884/90381-
Fonte: dc.identifier.urihttp://educapes.capes.gov.br/handle/1884/90381-
Descrição: dc.descriptionOrientador: Prof. Dr. Silvio Marques Zanata-
Descrição: dc.descriptionCoorientador: MSc. Mariane Pagno de Souza Bueno-
Descrição: dc.descriptionMonografia (graduação) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Curso de Graduação em Biomedicina.-
Descrição: dc.descriptionInclui referências-
Descrição: dc.descriptionResumo : A ubiquitina é uma proteína de 76 aminoácidos que controla diversos processos celulares, sendo um dos mais relevantes a degradação de proteínas a partir do proteassoma 26S. Esta proteína é encontrada no organismo a partir de genes precursores, como o UBB. As enzimas deubiquitinases removem as cadeias de ubiquitina de proteínas e são classificadas em 7 diferentes famílias, sendo uma delas a família USP. A USP2a está envolvida em adenocarcinomas de próstata humana e há poucos inibidores disponíveis para essa enzima no mercado, o que limita a USP2a como alvo terapêutico. Além da própria USP2a purificada, a obtenção do substrato UBB é etapa fundamental no desenvolvimento de ensaios de deubiquitinase na aceleração das pesquisas para obtenção e caracterização de novos inibidores para a USP2a. Para a expressão recombinante de UBB, foi feito um ensaio de expressão em pequena escala do vetor pET24a-HsUB, seguido de uma avaliação com três meios diferentes: LB, ZYM e TB. Como resultado, mostrou-se mais adequada a condição de expressão em meio ZYM (pré-inóculo em LB), a qual foi empregada em etapas subsequentes em média escala (0,5 L). A purificação da UBB foi feita por cromatografia de afinidade a metal (Ni-NTA agarose), sendo que o rendimento total de proteína foi estimada em 1,1 mg/L e a pureza obtida para a UBB foi adequada para a utilização como substrato para o ensaio de deubiquitinase. O ensaio utilizando extratos de células superexpressando USP2a e USP2a recombinante evidenciou a atividade proteolítica da USP2a sobre UBB, sugerindo que a poli-ubiquitina pode ser usada em ensaio de deubiquitinase para identificar inibidores da USP2a-
Formato: dc.format1 recurso online : PDF.-
Formato: dc.formatapplication/pdf-
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Palavras-chave: dc.subjectProteínas-
Palavras-chave: dc.subjectUbiquitina-
Palavras-chave: dc.subjectAminoácidos-
Título: dc.titleProdução recombinante do precursor de ubiquitina UBB (tetra ubiquitina) e seu uso como substrato em ensaio de deubiquitinase-
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