Expressão e caracterização dos dominios central+C- terminal da proteina NIFA de Herbaspirillum seropedicae

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MetadadosDescriçãoIdioma
Autor(es): dc.contributorChubatsu, Leda Satie, 1966--
Autor(es): dc.contributorPedrosa, Fabio O., 1947--
Autor(es): dc.contributorUniversidade Federal do Paraná. Setor de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Ciências (Bioquímica)-
Autor(es): dc.creatorMonteiro, Rose Adele-
Data de aceite: dc.date.accessioned2025-09-01T11:18:56Z-
Data de disponibilização: dc.date.available2025-09-01T11:18:56Z-
Data de envio: dc.date.issued2024-04-26-
Data de envio: dc.date.issued2024-04-26-
Data de envio: dc.date.issued1998-
Fonte completa do material: dc.identifierhttps://hdl.handle.net/1884/87394-
Fonte: dc.identifier.urihttp://educapes.capes.gov.br/handle/1884/87394-
Descrição: dc.descriptionOrientadores: Leda Satie Chubastu, Fabio de Oliveira Pedrosa-
Descrição: dc.descriptionDissertação (mestrado) - Universidade Federal do Parana-
Descrição: dc.descriptionResumo: A proteína NifA é responsável pela ativação da transcrição dos operons nif em diazotrofos. Neste trabalho são apresentados resultados referentes a expressão e caracterização in vivo e in vitro dos domínios Central e C-terminal da proteína NifA H. seropedicae. Para a produção da proteína, dois sistemas foram utilizados: a expressão como proteína de fusão a glutationa S-transferase ou a um polipeptídeo contendo histidinas (His-Tag). A expressão da proteína de fusão GST-Central+C-terminal foi elevada, porém apresentou-se de forma insolúvel. Após processo de desnaturação e renaturação, a proteína foi purificada por cromatografia de afinidade e testada quanto a sua capacidade de ligação ao DNA, apresentando um resultado negativo. A proteína também foi utilizada para a produção de anticorpos policlonais. Testes de "immunoblot" indicaram que os anticorpos reconhecem a proteína NifA nativa e seus domínios Central e C-terminal, não reconhecendo a proteína homóloga de K. pneumoniae ou a glutationa S-transferase. A proteína de fusão His-Tag Central+C-terminal também apresentou um elevado grau de expressão e mostrou-se parcialmente solúvel. Após cromatografia por afinidade, a proteína foi capaz de ligar-se a região promotora do gene nifB de H. seropedicae de forma específica. Ensaios in vivo em E. coli, utilizando fusões nifH::lacZ, mostraram que a proteína é capaz de ativar a transcrição na ausência de O2 e independente da concentração de íons NH4+ . NifA íntegra, expressa e analisada nas mesmas condições, não mostrou capacidade de ativar a transcrição indicando a ausência de uma proteína reguladora para a sua atividade em E. coli.-
Formato: dc.format126 f. : il. color. ; 30 cm.-
Formato: dc.formatapplication/pdf-
Formato: dc.formatapplication/pdf-
Relação: dc.relationDisponível em formato digital-
Palavras-chave: dc.subjectBioquímica-
Palavras-chave: dc.subjectNitrogênio - Fixação-
Palavras-chave: dc.subjectMicroorganismos fixadores de nitrogenio-
Palavras-chave: dc.subjectHerbaspirillum seropedicae-
Palavras-chave: dc.subjectBacterias diazotroficas-
Palavras-chave: dc.subjectTeses-
Título: dc.titleExpressão e caracterização dos dominios central+C- terminal da proteina NIFA de Herbaspirillum seropedicae-
Tipo de arquivo: dc.typelivro digital-
Aparece nas coleções:Repositório Institucional - Rede Paraná Acervo

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