Determinação de seqüencias de DNA reconhecidas por proteínas reguladoras de transcrição dependentes do fator sigma 54 da RNA-polimerase de Herbaspirillum seropedicae

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MetadadosDescriçãoIdioma
Autor(es): dc.contributorSouza, Emanuel Maltempi de, 1964--
Autor(es): dc.contributorPedrosa, Fabio O., 1947--
Autor(es): dc.contributorUniversidade Federal do Paraná. Setor de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Ciências (Bioquímica)-
Autor(es): dc.creatorInvitti, Adriana Luckow-
Data de aceite: dc.date.accessioned2025-09-01T10:50:17Z-
Data de disponibilização: dc.date.available2025-09-01T10:50:17Z-
Data de envio: dc.date.issued2025-02-05-
Data de envio: dc.date.issued2025-02-05-
Data de envio: dc.date.issued2006-
Fonte completa do material: dc.identifierhttps://hdl.handle.net/1884/6614-
Fonte: dc.identifier.urihttp://educapes.capes.gov.br/handle/1884/6614-
Descrição: dc.descriptionBanca: Emanuel Maltempi de Souza [Orientador]-
Descrição: dc.descriptionData da defesa: 2006.02.27-
Descrição: dc.descriptionBanca: Fábio de Oliveira Pedrosa [Orientador]-
Descrição: dc.descriptionDissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Bioquímica. Defesa: Curitiba, 27/02/2006-
Descrição: dc.descriptionInclui bibliografia-
Descrição: dc.descriptionA regulação da expressão gênica ocorre principalmente em nível transcricional. Proteínas reguladoras de transcrição, que podem funcionar como ativadores ou repressores, são os moduladores da atividade da RNA-polimerase e determinam os níveis de mRNA em respostas as condições fisiológicas prevalentes. Os ativadores de transcrição dependentes do fator sigma 54 da RNA-polimerase, também conhecidos por EBPs (enhancer binding proteins), constituem uma classe distinta de proteínas reguladoras de transcrição e exercem sua atividade de maneira semelhante àquela das proteínas reguladoras de transcrição de eucariotos. As EBPs ativam a transcrição a partir de promotores específicos e mediante a hidrólise de ATP catalisam a isomerização do complexo fechado a complexo aberto. Em Herbaspirillum seropedicae duas proteínas dessa família já foram caracterizadas, NifA e NtrC. Uma busca no banco de dados do Programa Genoma do Paraná (GENOPAR) identificou a presença de 11 prováveis proteínas reguladoras de transcrição dependentes de sigma 54 no genoma de H. seropedicae. Os domínios estruturais dessas proteínas foram identificados e três delas, denominadas 208.0173, 216.0019 e 287.0556, foram selecionadas para identificação dos seus sítios de ligação ao DNA. Fragmentos de DNA codificando o domínio de ligação ao DNA dessas três proteínas foram amplificados por PCR, clonados no vetor pGEM-T e subclonados no vetor de expressão pET28a. Um novo método para isolamento de aptâmeros foi desenvolvido neste trabalho. Os domínios de ligação ao DNA das três proteínas foram então superexpressos, purificados, submetidos a reações de interação DNA-proteína e os aptâmeros foram isolados por cromatografia de afinidade em uma mini-coluna de agarose-NTA-Ni+². Os aptâmeros de DNA obtidos foram sequenciados e apresentaram homologia com regiões do genoma de H. seropedicae a montante de diversos genes. A proteína 208.0173 provavelmente regula a expressão dos genes thdF, fhaC e xdhC; 216.0019 dos genes prhA e osmY e 287.0556 do gene fixG.-
Formato: dc.formatxiv, 84f. : il. color., tabs.-
Formato: dc.formatapplication/pdf-
Formato: dc.formatapplication/pdf-
Relação: dc.relationDisponível em formato digital-
Palavras-chave: dc.subjectBioquímica-
Palavras-chave: dc.subjectHerbaspirillum seropedicae-
Palavras-chave: dc.subjectRNA polimerases-
Título: dc.titleDeterminação de seqüencias de DNA reconhecidas por proteínas reguladoras de transcrição dependentes do fator sigma 54 da RNA-polimerase de Herbaspirillum seropedicae-
Tipo de arquivo: dc.typelivro digital-
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