Expressão de gtpases recombinates : purificação e uso em enssaios de pull-down

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Autor(es): dc.contributorSouza, Luiz Eduardo Rizzo de-
Autor(es): dc.contributorZanata, Silvio Marques, 1974--
Autor(es): dc.contributorUniversidade Federal do Paraná. Setor de Ciências Biológicas. Curso de Graduação em Ciências Biológicas-
Autor(es): dc.creatorBilek, Evandro Santos-
Data de aceite: dc.date.accessioned2025-09-01T10:31:31Z-
Data de disponibilização: dc.date.available2025-09-01T10:31:31Z-
Data de envio: dc.date.issued2022-08-24-
Data de envio: dc.date.issued2022-08-24-
Data de envio: dc.date.issued2014-
Fonte completa do material: dc.identifierhttps://hdl.handle.net/1884/35690-
Fonte: dc.identifier.urihttp://educapes.capes.gov.br/handle/1884/35690-
Descrição: dc.descriptionOrientador: Luiz Eduardo Rizzo de Souza-
Descrição: dc.descriptionCoorientador: Silvio Marques Zanata-
Descrição: dc.descriptionMonografia (Bacharelado) - Universidade Federal do Paraná. Setor de Ciências Biológicas. Curso de Graduação em Ciências Biológicas-
Descrição: dc.descriptionResumo : A GTPase Rnd1 é um membro da família Rho de GTPases que apresenta a peculiaridade de estar constitutivamente em seu estado ativo (ligado a GTP). Seu papel na célula está ligado à plasticidade do citoesqueleto, com especial importância no desenvolvimento do sistema nervoso. A proteína STI-1, assim como a Rnd1, é expressa em neurônios e células da glia. Dentre suas funções estão neuroproteção, neuritogênese, dobramento de proteínas (é uma co-chaperona), e, mais recentemente, regulação do citoesqueleto. Considerando o papel desempenhado pelas duas proteínas no desenvolvimento do sistema nervoso, e a literatura científica atual, levantou-se a hipótese de que as duas pudessem atuar em conjunto, e que STI1 possivelmente seria responsável por regular a atividade da Rnd1. Assim, o objetivo deste trabalho foi caracterizar uma possível interação in vitro entre Rnd1 e STI1. Para tanto, foram expressas em sistema heterólogo de E. coli as GTPases recombinantes Rnd1, Rnd2, e RhoD, previamente clonadas em vetores pGEX 4T2, que confere um tag de GST. Tais proteínas foram imobilizadas em matriz sólida de Glutationa-Sepharose e incubadas com extratos totais de encéfalo de camundongos para ensaios de pulldown. As proteínas foram eluídas das matrizes com tampão de amostra. Os eluatos foram então analisados em SDS-PAGE e western blotting com os anticorpos específicos anti-GST e anti-STI1. Os resultados evidenciaram interação específica entre GST-Rnd1 e STI1. As três proteínas citadas foram também expressas em larga escala e purificadas, para ensaios bioquímicos futuros.-
Formato: dc.format1 recurso online : PDF.-
Formato: dc.formatapplication/pdf-
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Relação: dc.relationExigências do sistema: Adobe Acrobat Reader-
Palavras-chave: dc.subjectProteínas-
Palavras-chave: dc.subjectBioquímica-
Título: dc.titleExpressão de gtpases recombinates : purificação e uso em enssaios de pull-down-
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