Produção de insumos para imunodiagnóstico de herpesvírus bovino 1 e 5

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Autor(es): dc.contributorSoccol, Vanete Thomaz-
Autor(es): dc.contributorUniversidade Federal do Paraná. Setor de Tecnologia. Programa de Pós-Graduaçao em Processos Biotecnológicos-
Autor(es): dc.creatorPenha, Tânia Regina-
Data de aceite: dc.date.accessioned2019-08-21T23:48:51Z-
Data de disponibilização: dc.date.available2019-08-21T23:48:51Z-
Data de envio: dc.date.issued2014-05-08-
Data de envio: dc.date.issued2014-05-08-
Data de envio: dc.date.issued2012-
Fonte completa do material: dc.identifierhttp://hdl.handle.net/1884/35041-
Fonte: dc.identifier.urihttp://educapes.capes.gov.br/handle/1884/35041-
Descrição: dc.descriptionResumo: As infecções causadas por herpesvírus bovino tipos 1 (BoHV-1) e 5 (BoHV-5), membros da família Herpesviridae, têm sido associadas a apresentações clínicas e subclínicas nesta espécie animal. As similaridades genômica e antigênica entre ambos representam um grande desafio para o diagnóstico laboratorial destas infecções. Os objetivos do presente estudo foram inicialmente identificar duas cepas (A e B), isoladas de casos clínicos, pelas técnicas de Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) e Análise de Enzima de Restrição (REA) utilizando o gene da glicoproteína C (gC) e enzima BglI, respectivamente. Os amplicons obtidos para as referidas amostras apresentaram bandas em torno de 572 a 575 pb, respectivamente. Na REA, a amostra B apresentou dois fragmentos (333 pb e 239 pb) enquanto que a amostra A permaneceu com um único fragmento de aproximadamente 572 pb. O sequenciamento parcial dos genes da gC revelou 572 nucleotídeos para a amostra A compatível com o BoHV-1 do sub tipo 1.1. A amostra B indicou 575 nucleotídeos e foi agrupada com o BoHV-5. Na segunda etapa deste estudo a amostra B foi utilizada para produzir 61 hibridomas produtores de anticorpos monoclonais (AcMc) anti-BoHV-5 dos quais apenas dois (8E11 e 3B2) reagiram com a cepa BoHV-5 sendo tal reação revelada pelo teste de imunoperoxidase (IPX). A última etapa deste trabalho referiu-se à construção de um plasmídeo recombinante para a expressão da proteína gG126 do envelope da cepa A (BoHV-1). Os primers desenhados foram amplificados, clonados e expresso em E. coli. A atividade da proteína produzida foi testada frente a soros bovinos positivos, hiperimunes e negativos contra BoHV-1. Soros hiperimune e AcMc anti-BoHV-5 também foram testados. A proteína recombinante mostrou reatividade frente aos soros bovinos positivos e hiperimune anti-BoHV-1, bem como ao soro hiperimune anti-BoHV-5. No entanto, não foi reconhecida quando submetida a soro anti-BoHV-1 negativo e anticorpos monoclonais anti-BoHV-5. Conclui-se, a partir dos resultados obtidos, que as técnicas moleculares são importantes ferramentas para caracterização de cepas de BoHV-1 e BoHV-5. Além disso, os AcMc anti-BoHV-5 e a proteína recombinante gG126 do BoHV-1 produzidos representam potenciais insumos para o desenvolvimento de testes diagnósticos visando estratégias futuras para o controle e prevenção das infecções pelos herpesvírus destes tipos.-
Formato: dc.formatapplication/pdf-
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Palavras-chave: dc.subjectTeses-
Título: dc.titleProdução de insumos para imunodiagnóstico de herpesvírus bovino 1 e 5-
Tipo de arquivo: dc.typelivro digital-
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