Caracterização de proteínas NIFA mutantes pontuais de Herbaspirillum Seropedicae

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Autor(es): dc.contributorUniversidade Federal do Paraná. Setor de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Ciências (Bioquímica)-
Autor(es): dc.contributorChubatsu, Leda Satie, 1966--
Autor(es): dc.contributorMonteiro, Rose Adele-
Autor(es): dc.creatorAquino, Bruno-
Data de aceite: dc.date.accessioned2019-08-22T00:05:32Z-
Data de disponibilização: dc.date.available2019-08-22T00:05:32Z-
Data de envio: dc.date.issued2014-04-02-
Data de envio: dc.date.issued2014-04-02-
Data de envio: dc.date.issued2012-
Fonte completa do material: dc.identifierhttp://hdl.handle.net/1884/34950-
Fonte: dc.identifier.urihttp://educapes.capes.gov.br/handle/1884/34950-
Descrição: dc.descriptionResumo: A proteína NifA é o principal regulador transcricional da fixação biológica de nitrogênio. Essa proteína é responsável pela ativação dos genes nif e sua atividade é regulada pelos níveis de nitrogênio e oxigênio. NifA possui três domínios estruturais: um domínio N-terminal regulatório que possui um motivo GAF; um domínio central que possui a função de hidrolisar o ATP e catalizar a formação do complexo aberto; e um domínio C-terminal que é responsável pela ligação ao DNA. Em Herbaspirillim seropedicae, uma ?-proteobacteria capaz de colonizar gramíneas de interesse comercial, o domínio N-terminal GAF responde aos níveis de nitrogênio fixado de forma dependente da proteína transdutora de sinais GlnK. Quando o domínio regulatório GAF é removido, a proteína continua ativa, porém perde a regulação por nitrogênio. A proteína NifA também é ativa somente em condições de baixa concentração de oxigênio e esta sensibilidade está relacionada a um provável cluster de FeS presente no domínio central e região interdomínio com o domínio Cterminal. Neste trabalho, utilizamos mutações sítio-dirigidas para analisar o mecanismo de regulação da NifA em resposta aos níveis de nitrogênio e também por oxigênio. As mutações K22V, T160E, M161V, L172R, A215D e S220I resultaram em proteínas NifA incapazes de ativar a síntese da nitrogenase. Por outro lado, a mutação Q216I, localizada do domínio central, resultou em uma proteína NifA ativa, com fenótipo semelhante à selvagem, sugerindo que a mutação introduzida não altera a regulação da proteína de forma significativa. Já a mutação G25E, localizada no domínio N-terminal, gerou uma proteína ativa regulada por nitrogênio, no entanto independente de GlnK. Esse resultado indica que o resíduo de glicina na posição 25 é importante tanto na interação com GlnK quanto na interação do domínio N-terminal com o domínio Central.-
Formato: dc.formatapplication/pdf-
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Palavras-chave: dc.subjectTeses-
Palavras-chave: dc.subjectHerbaspirillum-
Palavras-chave: dc.subjectProteinas-
Palavras-chave: dc.subjectBacterias nitrificantes-
Título: dc.titleCaracterização de proteínas NIFA mutantes pontuais de Herbaspirillum Seropedicae-
Tipo de arquivo: dc.typelivro digital-
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