Produção, identificação e caracterização molecular de lacases de Agaricus blazei obtidas por fermentação de resíduos agroindustriais

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MetadadosDescriçãoIdioma
Autor(es): dc.contributorVandenberghe, Luciana Porto de Souza-
Autor(es): dc.contributorSoccol, Carlos Ricardo 1953--
Autor(es): dc.contributorUniversidade Federal do Paraná. Setor de Tecnologia. Programa de Pós-Graduação em Engenharia de Bioprocessos Biotecnologia-
Autor(es): dc.creatorValle, Juliana Silveira do-
Data de aceite: dc.date.accessioned2019-08-22T00:32:50Z-
Data de disponibilização: dc.date.available2019-08-22T00:32:50Z-
Data de envio: dc.date.issued2013-10-09-
Data de envio: dc.date.issued2013-10-09-
Data de envio: dc.date.issued2013-10-09-
Fonte completa do material: dc.identifierhttp://hdl.handle.net/1884/32338-
Fonte: dc.identifier.urihttp://educapes.capes.gov.br/handle/1884/32338-
Descrição: dc.descriptionResumo: Lacases são multicobre oxidases que reduzem oxigênio a água ao mesmo tempo em que oxidam um substrato do tipo p-diidroxi fenol ou outro composto fenólico. São enzimas comuns a vários organismos, mas a maior parte foi isolada de fungos. Sua baixa especificidade a substratos torna a lacase uma enzima com potencial para aplicação em diversos processos industriais. Sua síntese e secreção são influenciadas pelos níveis de nutrientes, condições de cultivo e pela adição de compostos fenólicos ou aromáticos que atuam como indutores da atividade. O uso de resíduos agroindustriais para produção de lacases permite o desenvolvimento de bioprocessos empregando-se substratos alternativos e de baixo custo, bem como a redução da degradação ambiental causada pelo descarte desses resíduos. Os objetivos desse trabalho foram produzir lacases de Agaricus blazei por fermentação submersa utilizando resíduos agroindustriais como fontes alternativas de carbono, identificar, sequenciar e analisar genes de lacase dessa espécie. Para tanto cinco cepas pertencentes à coleção de culturas do Laboratório de Biologia Molecular da Universidade Paranaense (UNIPAR) foram avaliadas. As cepas estudadas foram identificadas molecularmente como Agaricus blazei (U2/1, U2/2, U2/3 e U2/4) e Pleurotus ostreatus (U9/1). A produção de lacase sob diferentes concentrações da fonte nitrogênio e de CuSO4 foi estudada. Seis possíveis indutores foram analisados com o intuito de verificar o seu efeito sobre a atividade enzimática das cinco cepas. A produção de lacase em meio com ureia (6,0 g/L) e CuSO4 (150 M) ao final de 21 dias atingiu 13,7 U mL-1 por A. blazei (U2/4) e 14,2 U mL-1 por P. ostreatus (U9/1). Dentre as cepas avaliadas e todas as condições testadas, as maiores atividades induzidas de lacase foram verificadas para A. blazei U2/4 (8,4 U mL-1 com etanol e 8,5 U/mL com guaiacol) e P. ostreatus U9/1 (15 U mL-1 com etanol). Foram realizadas uma série de otimizações para a produção de lacase por fermentação submersa (FSm) utilizando como substratos resíduos agroindustriais com Agaricus blazei U2/4. O potencial dessa linhagem na produção de lacase por fermentação no estado sólido (FES) também foi estudado. A melhor fonte alternativa de carbono para produção de lacase em FSm foi o mel de cana. Após otimização das condições físico-químicas, verificou-se que o pico de atividade de lacase (9711 U L-1) foi obtido em meio composto por mel de cana (6 g L-1), ureia (1,5 g L-1), CuSO4 (150 M), MgSO4 (12 mM), etanol (1,2 mM), a 28ºC e pH 8,0 em 10 dias de cultivo. Em FES a maior atividade (284 U g-1 na base seca) foi obtida após 7 dias com bagaço de cana suplementado com solução nutritiva contendo ureia (6,0 g L-1) e CuSO4 (150 M), pH 8,0 e temperatura de 28ºC. Primers universais foram utilizados para identificar genes de lacase de Agaricus blazei (U2/1, U2/2, U2/3 e U2/4) e Pleurotus ostreatus (U9/1) por PCR. A digestão dos amplicons com endonucleases de restrição confirmou que os mesmos correspondiam a mais de um gene. A análise da sequência dos amplicons revelou a presença de sequências consenso típicas de promotores (TATABox e CAATBox) e a presença de elementos relacionados à regulação da expressão gênica, como elementos sensíveis a xenobióticos e elementos de resposta ao stress. As sequências de aminoácidos deduzidas mostraram elevada similaridade dos genes estudados com outras lacases fúngicas e apresentaram ao menos um domínio conservado pertencente à família das cobre oxidases.-
Formato: dc.formatapplication/pdf-
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Palavras-chave: dc.subjectTeses-
Título: dc.titleProdução, identificação e caracterização molecular de lacases de Agaricus blazei obtidas por fermentação de resíduos agroindustriais-
Tipo de arquivo: dc.typelivro digital-
Aparece nas coleções:Repositório Institucional - Rede Paraná Acervo

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