Clonagem e expressao do gene GinB de Azospirillum brasilense

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MetadadosDescriçãoIdioma
Autor(es): dc.contributorChubatsu, Leda Satie, 1966--
Autor(es): dc.contributorPedrosa, Fabio O., 1947--
Autor(es): dc.contributorUniversidade Federal do Paraná. Setor de Ciências Biológicas. Curso de Graduação em Ciências Biológicas-
Autor(es): dc.creatorAraújo, Luíza Maria de-
Data de aceite: dc.date.accessioned2025-09-01T13:04:23Z-
Data de disponibilização: dc.date.available2025-09-01T13:04:23Z-
Data de envio: dc.date.issued2022-09-01-
Data de envio: dc.date.issued2022-09-01-
Data de envio: dc.date.issued2000-
Fonte completa do material: dc.identifierhttps://hdl.handle.net/1884/32285-
Fonte: dc.identifier.urihttp://educapes.capes.gov.br/handle/1884/32285-
Descrição: dc.descriptionOrientadores: Leda Satie Chubatsu e Fábio de Oliveira Pedrosa-
Descrição: dc.descriptionMonografia (Bacharelado) - Universidade Federal do Paraná. Setor de Ciencias Biológicas. Curso de Graduaçao em Ciencias Biológicas-
Descrição: dc.descriptionResumo : Azospirillum brasilense é um microrganismo, diazotrofo, endofítico facultativo, encontrado em associação com inúmeras plantas de importância agrícola. O processo de fixação do nitrogênio envolve um alto gasto energético, sendo altamente regulado tanto a nível da síntese do complexo enzimático nitrogenase, quanto a nível de sua atividade. A proteína PII (GinS), produto do gene glnB, é uma das proteínas envolvidas na cascata de regulação da fixação de nitrogênio. Esta proteína é responsável pelo sensoriamento dos níveis de nitrogênio intracelular. O gene glnB de Azospirillum brasilense foi clonado a partir da amplificação por peR utilizando como molde o DNA genômico deste organismo e oligonucleotídeos sintetizados quimicamente. A seqüência de bases desses oligonucleotídeos foi baseada naquela depositada no banco de dados GENSANK. O fragmento amplificado de 369 pb foi clonado e sequenciado nos vetores de expressão pET28a e pT7-7 entre os sítios Ndel e BamHI e no vetor pTZ19R entre os sítios Xbal e Hindlll, originando os plasmídeos pLMA-MLV1 pLMA-4 e pLMA-2, respectivamente. Após crescimento e indução com IPTG ou lactose, a proteína PII foi superexpressa. O plasmídeo pLMA-MLV1 expressou a proteína PII como uma fusão a uma sequência contendo 6 histidinas (His-Tag) enquanto o plasmídeo pLMA-4 expressou a proteína PII nativa. A taxa de migração das proteínas em gel de poliacrilamida-SDS foi do tamanho esperado, 15 kDa para a proteína PII-His e 13 kDa para a proteína PII nativa. Ambas as proteínas, PII nativa e PII-His, foram superexpressas e encontradas solúveis.-
Formato: dc.format1 recurso online : PDF.-
Formato: dc.formatapplication/pdf-
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Palavras-chave: dc.subjectAzospirillum brasilense-
Título: dc.titleClonagem e expressao do gene GinB de Azospirillum brasilense-
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