Caracterização in silico, clonagem, superexpressão e purificação da proteína trealose-6-fosfato fosfatase de Herbaspirillum seropedicae

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MetadadosDescriçãoIdioma
Autor(es): dc.contributorSouza, Emanuel Maltempi de, 1964--
Autor(es): dc.contributorMüller-Santos, Marcelo, 1979--
Autor(es): dc.contributorUniversidade Federal do Paraná. Setor de Ciências Biológicas. Curso de Graduação em Ciências Biológicas-
Autor(es): dc.creatorPetruzzielo, Stefania-
Data de aceite: dc.date.accessioned2025-09-01T13:11:02Z-
Data de disponibilização: dc.date.available2025-09-01T13:11:02Z-
Data de envio: dc.date.issued2022-09-16-
Data de envio: dc.date.issued2022-09-16-
Data de envio: dc.date.issued2009-
Fonte completa do material: dc.identifierhttps://hdl.handle.net/1884/30362-
Fonte: dc.identifier.urihttp://educapes.capes.gov.br/handle/1884/30362-
Descrição: dc.descriptionOrientador: Emanuel Maltempi de Souza-
Descrição: dc.descriptionCoorientador: Marcelo Mûller-Santos-
Descrição: dc.descriptionMonografia (Bacharelado) - Universidade Federal do Paraná. Setor de Ciências Biológicas. Curso de Graduação em Ciências Biológicas-
Descrição: dc.descriptionResumo : Herbaspirillum seropedicae é uma bactéria diazotrófica, gram-negativa e capaz de colonizar gramíneas. Como muitas outras espécies, ela também possui a capacidade de sintetizar o dissacarídeo trealose a partir de UDP-glucose e glucose6-fosfato. A trealose é um açúcar essencial para a célula em condições ambientais extremas, como seca e salinidade elevada, pois interage com as proteínas e lipídeos, estabilizando a sua conformação. O acúmulo de trealose em plantas de interesse econômico é essencial para aumentar a capacidade de sobrevivência frente a condições ambientais adversas. Isto pode ser alcançado introduzindo e superexpressando os genes da síntese da trealose de outras espécies em células vegetais. Em H. seropedicae, a via de biossíntese da trealose é formada por dois genes: o otsA, codifica a trealose-6-fosfato sintase (TPS) e o otsB, codifica a trealose-6-fosfato fosfatase (TPP). O objetivo deste trabalho é a caracterização da proteína TPP. A proteína TPP é membro da superfamília HAD (dehalogenase haloácida), caracterizada por dobras a/ß-hidrolase na estrutura das enzimas e pela utilização de um resíduo de aspartato como nucleófilo na reação catalisada. Através da análise comparativa com a TPP de Thermoplasma acidophilum, gerou-se um modelo tridimensional teórico para a TPP de H. seropedicae. O modelo mostrou que a proteína possui um domínio central com dobras a/ß-hidrolase e um possível cap do tipo C2. Além disso, observou-se evidente semelhança na composição e distribuição espacial dos aminoácidos que compõem o sítio ativo das TPPs dos dois organismos, sugerindo afinidade pelo mesmo tipo de substrato. O gene otsB foi amplificado a partir do DNA cromossomal da bactéria e clonado no vetor de expressão pET-28a. A proteína TPP foi então superexpressa e purificada por cromatografia de afinidade. Os ensaios enzimáticos foram realizados utilizando p-nitrofenol fosfato (pNPP) como substrato e indicaram que a enzima possui atividade ótima a 50ºC, em tampão PIPES pH 6,1. A atividade da TPP mostrou-se dependente de Mg2+, indicando ser este o provável cofator da enzima, e suscetível à inibição competitiva por Ca2+. Este trabalho inicia a caracterização dos genes da via de biossíntese de trealose em Herbaspirillum seropedicae. Uma vez concluído, o estudo permitirá uma melhor compreensão da potencialidade e eficiência das enzimas deste organismo envolvidas na produção final do dissacarídeo.-
Formato: dc.format1 recurso online : PDF.-
Formato: dc.formatapplication/pdf-
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Relação: dc.relationExigências do sistema: Adobe Acrobat Reader-
Palavras-chave: dc.subjectHerbaspirillum-
Palavras-chave: dc.subjectTrealose-
Título: dc.titleCaracterização in silico, clonagem, superexpressão e purificação da proteína trealose-6-fosfato fosfatase de Herbaspirillum seropedicae-
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