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Metadados | Descrição | Idioma |
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Autor(es): dc.contributor | Souza, Emanuel Maltempi de, 1964- | - |
Autor(es): dc.contributor | Araújo, Luíza Maria de | - |
Autor(es): dc.contributor | Universidade Federal do Paraná. Setor de Ciências Biológicas. Curso de Graduação em Ciências Biológicas | - |
Autor(es): dc.creator | Sotomaior, Patricia | - |
Data de aceite: dc.date.accessioned | 2025-09-01T11:28:23Z | - |
Data de disponibilização: dc.date.available | 2025-09-01T11:28:23Z | - |
Data de envio: dc.date.issued | 2022-09-06 | - |
Data de envio: dc.date.issued | 2022-09-06 | - |
Data de envio: dc.date.issued | 2009 | - |
Fonte completa do material: dc.identifier | https://hdl.handle.net/1884/30309 | - |
Fonte: dc.identifier.uri | http://educapes.capes.gov.br/handle/1884/30309 | - |
Descrição: dc.description | Orientador: Emanuel Maltempi de Souza | - |
Descrição: dc.description | Coorientadora: Luíza Maria de Araújo | - |
Descrição: dc.description | Monografia (Bacharelado) - Universidade Federal do Paraná. Setor de Ciências Biológicas. Curso de Graduação em Ciências Biológicas | - |
Descrição: dc.description | Resumo : A fixação biológica de nitrogênio é fundamental para disponibilizar este elemento em uma forma que seja metabolicamente utilizável pela maioria dos organismos. Nas bactérias diazotróficas, que são capazes de fixar nitrogênio, a transcrição dos genes envolvidos neste processo é ativada pela proteína NifA, que tem sua atividade controlada pelos níveis de amônio e oxigênio. Em Azotobacter vinelandii, os genes nifLA estão agrupados em um operon; a proteína NifA tem atividade constitutiva, mas é inativada por NifL em altas concentrações de amônio e/ou oxigênio. Por outro lado, em Azospirillum brasilense, apenas o gene que codifica para a proteína NifA está presente e, neste caso, a própria proteína NifA responde às alterações dos níveis de amônio e oxigênio, através de um mecanismo que envolve sua auto-inibição via o domínio N-terminal. A proteína NifA de A. brasilense é composta por três domínios separados por duas regiões interdomínios. O domínio N-terminal está relacionado com o controle da atividade da proteína por amônio enquanto que a sensibilidade ao oxigênio está relacionada ao interdomínio que conecta o domínio central ao domínio C-terminal. O domínio central é responsável pela interação com a RNA polimerase e ativação da transcrição, enquanto o domínio C-terminal interage com seqüências específicas de DNA. Para estudar o mecanismo de regulação da atividade da proteína NifA de A. brasilense e obter uma proteína NifA insensível aos níveis de amônio foram construídos dois genes quiméricos: nifAQ1Ab, que codifica o domínio N-terminal da proteína NifA de A. brasilense ligado ao domínio central + C-terminal da proteína NifA de A. vinelandii, e nifAQ2Ab, que codifica o domínio N-terminal da proteína NifA de A. vinelandii ligado ao domínio central + C-terminal da proteína NifA de A. brasilense. Fragmentos de DNA contendo as regiões de interesse foram obtidos por reação de PCR utilizando DNA genômino de A. brasilense e um plasmídeo contendo o gene nifA de A. vinelandii como moldes. Os produtos de PCR foram clonados separadamente no vetor pCR2.1. Após confirmação das seqüências de DNA clonadas, os insertos foram clivados com HindIII e XbaI e ligados no vetor pDK7. Em seguida, os genes quiméricos foram montados no vetor de expressão pET28a, unindo as regiões que correspondem aos domínios N-terminal de A. brasilense e central + C-terminal de A. vinelandii ou aos domínios N-terminal de A. vinelandii e central + C-terminal de A. brasilense. A partir da montagem dos genes quiméricos no vetor pET28a foi possível fazer a expressão da proteína quimérica NifAQ1Ab em E. coli e determinar as melhores condições para sua solubilização. Os genes quiméricos foram construídos com sucesso e a expressão da proteína quimérica NifAQ1Ab revelou a alta insolubilidade dessa proteína. Os ensaios de expressão mostraram que as melhores condições de expressão foram obtidas após indução a 37ºC a partir de 2 horas ou a 18ºC durante a noite, utilizando IPTG 0,5mmol/L ou lactose 0,5% como indutores. | - |
Formato: dc.format | 1 recurso online : PDF. | - |
Formato: dc.format | application/pdf | - |
Formato: dc.format | application/pdf | - |
Relação: dc.relation | Exigências do sistema: Adobe Acrobat Reader | - |
Palavras-chave: dc.subject | Azospirillum brasilense | - |
Palavras-chave: dc.subject | Bactérias nitrificantes | - |
Título: dc.title | Construção e expressão da proteína quimérica NifAQ1Ab de Azospirillum brasiliense | - |
Aparece nas coleções: | Repositório Institucional - Rede Paraná Acervo |
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