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Ação in vitro das vitaminas C e E em eritrócitos humanos submetidos à sobrecarga oxidativa induzida pelo cloridrato de fenil-hidrazina

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MetadadosDescriçãoIdioma
Autor(es): dc.contributorNascimento, Aguinaldo José do, 1946--
Autor(es): dc.contributorLeonart, Maria Suely Soares, 1949--
Autor(es): dc.contributorUniversidade Federal do Paraná. Setor de Ciências da Saúde.-
Autor(es): dc.creatorClaro, Lígia Maria-
Data de aceite: dc.date.accessioned2019-08-21T23:01:44Z-
Data de disponibilização: dc.date.available2019-08-21T23:01:44Z-
Data de envio: dc.date.issued2019-05-29-
Data de envio: dc.date.issued2019-05-29-
Data de envio: dc.date.issued2002-
Fonte completa do material: dc.identifierhttps://hdl.handle.net/1884/29394-
Fonte: dc.identifier.urihttp://educapes.capes.gov.br/handle/1884/29394-
Descrição: dc.descriptionOrientador : Aguinaldo José do Nascimento-
Descrição: dc.descriptionCo-orientadora : Maria Suely Soares-
Descrição: dc.descriptionDissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde-
Descrição: dc.descriptionResumo: No eritrócito humano maduro, o estresse oxidativo provoca a desnaturação da hemoglobina e a formação de complexos de ferro que, possivelmente, ocasionam anormalidades da membrana eritrocitária e contribuem para a destruição prematura do eritrócito. O eritrócito está equipado com um sistema antioxidante dependente de glutationa reduzida (GSH), vitaminas C e E, enzimas, entre outros. Este trabalho tem por objetivo estudar a ação oxidante de cloridrato de fenil-hidrazina (CF) sobre o eritrócito humano, associada ao efeito protetor antioxidante de vitamina C (VC) e de vitamina E (VE). Coletou-se sangue venoso de indivíduos saudáveis, em EDTAK3. Lavou-se os eritrócitos em tampão fosfato-salino (PBS) três vezes por centrifugação a 1500 x g, ressuspendendo-os em PBS em volume globular de 35%. Submeteu-se os eritrócitos à ação oxidante de CF durante 20 minutos, com ou sem pré-incubação durante 60 minutos com VC e/ou VE. Realizou-se a contagem de corpos de Heinz em técnica preconizada por BEUTLER et al (modificada por CLARO et al, Rev. Bras. Anál. Clin., 30: 94, 1998). Determinou-se a concentração de metahemoglobina em técnica de EVELYN e MALLOY (modificada por BEUTLER et al, Hematology, 1995); a concentração de GSH [BEUTLER et al, J. Lab. Clin. Med., 61: 882, 1963] e a porcentagem de hemólise [PELISSARI et al, Rev. Bras. Anál. Clin., 25: 14, 1993]. Observou-se um aumento da formação de corpos de Heinz (6,1-97,6%) e de metahemoglobina (2,4-21,6%) em função da concentração de CF (0,3-5 mM). A concentração de GSH diminuiu (4,05-2,67 jimoles/g Hb) e não se observou hemólise significativa em função do aumento de CF (0,3-5 mM). A formação de corpos de Heinz de 21,6 ± 3,8% por CF 1 mM foi inibida (8,4-0,2%) em função da concentração VC (10-90 mM). A VC (0,5-80 mM) diminuiu a formação de metahemoglobina induzida por CF 1 mM. Porém, na concentração de 90 mM, a VC não só pareceu perder o efeito antioxidante, como também provocou o aumento da formação de metahemoglobina. A VC (0,5-80 mM) não recuperou a GSH depletada por CF 1 mM. A VC (10-90 mM) provocou hemólise significativa (1,2; 1; 0,9 e 1,1%) nas concentrações de 10, 20, 80 e 90 mM; porém, em presença de CF 1 mM, provocou índices de hemólise mais significativos a partir de 30 mM (1,9%), e altas porcentagens em 80 e 90 mM (3,5 e 8,3%). A formação de corpos de Heinz de 20,3 ± 1,3% por CF 1 mM foi inibida (19-7,2%) em função da concentração de VE (0,1-80 mM). A VE (0,1-2 mM) diminuiu a formação de metahemoglobina induzida por CF 1 mM. Entre 3-80 mM de VE não houve efeito sobre a concentração da metahemoglobina formada por CF 1 mM. A VE (0,1-35 mM) não recuperou a GSH depletada por CF 1 mM. Ao se investigar uma possível ação sinérgica entre VC e VE, nas concentrações de 2 e 20 mM, na proteção contra a oxidação por CF 1 mM, observou-se que a presença de VE e VC juntas não contribuiu para aumentar o efeito inibitório sobre a formação de corpos de Heinz ou para inibir a diminuição de GSH, e reduziu a eficiência na inibição da formação de metahemoglobina. De um modo geral, os resultados obtidos sugerem que VC e VE contribuem para a diminuição do estresse oxidativo causado por CF. Porém, não se observou ação sinérgica entre ambas.-
Descrição: dc.descriptionAbstract: In the mature human erythrocyte, the oxidative stress produces the oxidation of the hemoglobin and the formation of complexes of iron and products of the hemoglobin denaturation, that possibly cause abnormalities on erythrocyte membrane and they contribute to the premature erythrocyte destruction. The erythrocytes have an antioxidant system, dependent on reduced glutatione (GSH), vitamins C and E, and enzymes, among others. The aim of this work was to study the oxidative action of phenylhydrazine hydrochloride (CF) on the human erythrocyte, associated to the antioxidant protective effect of vitamin C (VC) and vitamin E (VE). Venous blood was collected in EDTAK3, from healthy individuals. The erythrocytes were washed three times in phosphate-saline buffer (PSB) by centrifugation at 1500 x g, ressuspended in PSB in order to obtain 35% globular volume, and then submitted to the oxidative action of CF for 20 minutes, with or without previous incubation for 60 minutes with VC, VE or both. Heinz bodies were evaluated according to BEUTLER et al [modified by CLARO et al, Rev. Bras. Anal. Clin., 30: 94, 1998], It was determined the methemoglobin concentration [EVELYN & MALLOY, modified by BEUTLER et al, Hematology, 1995], GSH concentration [BEUTLER et al, J. Lab. Clin. Med., 61: 882, 1963] and the hemolysis percentage [PELISSARI et al, Rev. Bras. Anal. Clin., 25: 14, 1993]. Increase on Heinz bodies' formation (6.1 - 97.6%) and methemoglobin (2.4-21.6%) were observed as a function of the concentration of CF (0.3-5 mM). The concentration of GSH decreased (4.05 - 2.67 fimoles/g Hb) and the hemolysis percentage did not modify as function of the increase of CF (0.3-5 mM). Heinz bodies' formation of 21.6 ± 3.8% by CF 1 mM was inhibited (8.4-0.2%) as function of the VC concentration (10-90 mM). VC (0.5-80 mM) decreased the methemoglobin formation induced by CF 1 mM. In the concentration of 90 mM, VC, not only it seemed to lose the antioxidant effect, but it promoted the increase on the methemoglobin formation. VC (0.5-80 mM) did not recover the GSH depleted by CF 1 mM. VC produced significant hemolysis (1.2; 1; 0.9 and 1.1%), respectively at concentrations of 10, 20, 80 and 90 mM. But, in the presence of CF 1 mM the hemolysis indexes were more accentuated from 30 mM (1.9%) to 80 and 90 mM (3.5 and 8.3%). Heinz bodies' formation of 20.3 ± 1.3 % by CF 1 mM was inhibited (19-7.2%) as function of the concentration of VE (0.1 -80mM). VE (0.1-2 mM) decreased the methemoglobin formation induced by CF 1 mM. In the range of 3-80 mM VE did not lowered the concentration of the methemoglobin formed by CF 1 mM. VE did not recover the GSH depleted by CF 1 mM. When investigated a possible synergic action between VC and VE, at concentrations of 2 and 20 mM, in the protection against the oxidation by CF 1 mM, it was observed that the presence of VE together with VC, did not increase its inhibiting effect over the formation of Heinz bodies, they showed decreased efficiency in the inhibition of the methemoglobin formation and did not contribute to inhibit the decrease of GSH. In general, the results obtained suggest that VC and VE contribute to the decrease of the oxidative stress caused by CF, but no synergic action was observed.-
Formato: dc.format91f. : il., grafs.-
Formato: dc.formatapplication/pdf-
Formato: dc.formatapplication/pdf-
Título: dc.titleAção in vitro das vitaminas C e E em eritrócitos humanos submetidos à sobrecarga oxidativa induzida pelo cloridrato de fenil-hidrazina-
Tipo de arquivo: dc.typelivro digital-
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