Clonagem, expressão heteróloga e purificação de uma nova isoforma de fosfolipase-D presente no veneno de aranha-marron (Loxosceles intermedia)

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MetadadosDescriçãoIdioma
Autor(es): dc.contributorVeiga, Silvio Sanches-
Autor(es): dc.contributorUniversidade Federal do Paraná. Setor de Ciencias Biológicas. Programa de Pós-Graduaçao em Biologia Celular e Molecular-
Autor(es): dc.contributorChaim, Olga Meiri-
Autor(es): dc.creatorVuitika, Larissa-
Data de aceite: dc.date.accessioned2019-08-21T23:11:14Z-
Data de disponibilização: dc.date.available2019-08-21T23:11:14Z-
Data de envio: dc.date.issued2013-01-21-
Data de envio: dc.date.issued2013-01-21-
Data de envio: dc.date.issued2013-01-21-
Fonte completa do material: dc.identifierhttp://hdl.handle.net/1884/29274-
Fonte: dc.identifier.urihttp://educapes.capes.gov.br/handle/1884/29274-
Descrição: dc.descriptionResumo: Loxoscelismo é a denominação do quadro clínico provocado em pacientes picados por aranhas do gênero Loxosceles, caracterizado principalmente por causar lesão dermonecrótica com intensa resposta inflamatória no local da picada, e raramente ocorrem manifestações sistêmicas, como distúrbios renais e hematológicos. O veneno loxoscélico é um líquido cristalino e incolor composto essencialmente por proteínas e peptídeos entre 5 a 40kDa, contendo cerca de 30?g de proteínas. Sabe-se que as toxinas da família das fosfolipases-D são capazes de desencadear a maioria dos efeitos biológicos causados pelo envenenamento, tornando-se necessário o aprofundamento da ação completa desta toxina. Algumas isoformas de fosfolipases-D de veneno de aranha-marrom já foram identificadas e biologicamente caracterizadas. Após análise do transcriptoma da glândula produtora de veneno de Loxosceles intermedia, algumas prováveis novas isoformas desta toxina foram identificadas e, entre elas, uma se destacou por sua presença em proporção relevante. O objetivo deste trabalho foi a clonagem, expressão heteróloga e purificação desta nova isoforma de toxina dermonecrótica, de modo a permitir sua avaliação biológica por testes in vitro e in vivo. A partir de técnicas de biologia molecular, foi possível obter a sequência nucleotídica e, por sua vez, aminoacídica completas da LiRecDT7, relatando que esta possui uma substituição conservativa no resíduo de aminoácido Asp233'Glu233. Houve pouco rendimento na expressão da toxina recombinante na forma solúvel e o processo de purificação por cromatografia mostrou-se pouco eficiente. Os testes de atividade esfingomielinásica sugerem que esta toxina como enzima está ativa. Os resultados obtidos até o presente demonstram que esta toxina é uma nova isoforma de fosfolipase-D presente no veneno de L. intermedia. Ainda assim, o processo de expressão e purificação devem ser otimizados, para avaliá-la biologicamente, contribuindo para a compreensão da composição do veneno dessa espécie, além de ser mais uma alternativa de ferramenta com potencial de aplicação biotecnológica.-
Formato: dc.formatapplication/pdf-
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Palavras-chave: dc.subjectTeses-
Palavras-chave: dc.subjectAranha - Veneno-
Palavras-chave: dc.subjectFosfolipases-
Título: dc.titleClonagem, expressão heteróloga e purificação de uma nova isoforma de fosfolipase-D presente no veneno de aranha-marron (Loxosceles intermedia)-
Tipo de arquivo: dc.typelivro digital-
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