Caracterização das Enzimas Nad Sintetases (NadE1 e NadE2) de Herbaspirillum Seropedicae

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Autor(es): dc.contributorSouza, Emanuel Maltempi de, 1964--
Autor(es): dc.contributorHuergo, Luciano Fernandes-
Autor(es): dc.contributorUniversidade Federal do Paraná. Setor de Ciencias Biológicas. Programa de Pós-Graduaçao em Bioquímica-
Autor(es): dc.creatorLaskoski, Kerly-
Data de aceite: dc.date.accessioned2019-08-22T00:09:47Z-
Data de disponibilização: dc.date.available2019-08-22T00:09:47Z-
Data de envio: dc.date.issued2010-12-06-
Data de envio: dc.date.issued2010-12-06-
Data de envio: dc.date.issued2010-12-06-
Fonte completa do material: dc.identifierhttp://hdl.handle.net/1884/24920-
Fonte: dc.identifier.urihttp://educapes.capes.gov.br/handle/1884/24920-
Descrição: dc.descriptionResumo: As enzimas nicotinamida adenina dinucleotídeo sintetase (NadE) catalisam o último passo da biossíntese do cofator NAD utilizando como substratos o ATP, o ácido nicotínico adenina dinucleotídeo (NaAD) e uma fonte doadora de grupamento amino, que pode ser a glutamina ou a amônia. O interesse nessa enzima surgiu com a hipótese de uma possível relação funcional entre NadE1 e a proteína transdutora de sinal GlnB devido à conservação filogenética da proximidade física entre os genes que codificam estas proteínas. Em Herbaspirillum seropedicae o gene nadE1 encontra-se a montante do gene glnB. Em H. seropedicae foi identificado um gene homólogo a nadE1, denominado de nadE2. Os genes nadE1 e nadE2 foram amplificados por PCR e clonados no vetor pET28a; versões contendo uma fusão de 6 histidinas na porção N-terminal de NadE1 e de NadE2 foram superexpressas em Escherichia coli e purificadas através de cromatografia de afinidade usando a resina Hi-trap chelating. As proteínas purificadas foram utilizadas em ensaios de atividade enzimática in vitro. A síntese de NAD foi monitorada indiretamente adicionando a enzima álcool desidrogenase ao sistema para reduzir o NAD a NADH, que pode ser quantificado por espectrofotometria. A enzima NadE2 não apresentou atividade in vitro. NadE1 apresentou atividade específica de 1756 mU/mg e 600 mU/mg usando como fonte de grupo amino a amônia e a glutamina, respectivamente. Foram determinadas as constantes de Michaelis para os substratos ATP, glutamina, amônia e o NaAD. Os dados obtidos sugerem que NadE1 utiliza preferencialmente glutamina como fonte de grupos amino. A presença da proteína GlnB uridililada ou desuridililada ao sistema de reação não alterou a atividade de NadE1.-
Formato: dc.formatapplication/pdf-
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Palavras-chave: dc.subjectTeses-
Palavras-chave: dc.subjectEnzimas-
Palavras-chave: dc.subjectBacterias-
Título: dc.titleCaracterização das Enzimas Nad Sintetases (NadE1 e NadE2) de Herbaspirillum Seropedicae-
Tipo de arquivo: dc.typelivro digital-
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