RNA dupla fita em Guignardia Citricarpa

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MetadadosDescriçãoIdioma
Autor(es): dc.contributorKava-Cordeiro, Vanessa-
Autor(es): dc.contributorUniversidade Federal do Paraná. Setor de Ciencias Biológicas. Programa de Pós-Graduaçao em Genética-
Autor(es): dc.creatorMontenegro, Douglas Herrera-
Data de aceite: dc.date.accessioned2019-08-21T23:09:26Z-
Data de disponibilização: dc.date.available2019-08-21T23:09:26Z-
Data de envio: dc.date.issued2010-08-23-
Data de envio: dc.date.issued2010-08-23-
Data de envio: dc.date.issued2010-08-23-
Fonte completa do material: dc.identifierhttp://hdl.handle.net/1884/24184-
Fonte: dc.identifier.urihttp://educapes.capes.gov.br/handle/1884/24184-
Descrição: dc.descriptionResumo: Guignardia citricarpa e um ascomiceto de extrema importancia para a citricultura brasileira, pois e o agente causal da Mancha Preta dos Citros. Alguns isolados desta especie apresentam infeccao por virus de RNA dupla fita (RNAdf) com efeitos fenotipicos ainda desconhecidos. No presente estudo, sete isolados de G. citricarpa, previamente identificados como portadores de RNAdf, foram estudados. Estes isolados foram obtidos de 1996 a 2008, sendo um proveniente do estado do Parana, cinco de Sao Paulo e um da Africa do Sul. Diferentes protocolos de purificacao de RNAdf foram investigados e o melhor rendimento foi com a utilizacao de fenol acido (pH 4,7). Uma das formas de se analisar a influencia do RNAdf e atraves da obtencao de linhagens isogenicas, que diferem entre si pela presenca ou ausencia de RNAdf. Com o objetivo de obtencao de linhagens isogenicas, dois protocolos de cura do RNAdf e um de transmissao de RNAdf foram utilizados. Para a cura, foi feito o repique em meio com ciclohexamida, conforme relatado na literatura. Para G. citricarpa este metodo nao foi eficiente, pois o fungo teve seu crescimento completamente inibido mesmo em baixas concentracoes (0,5 ƒÊg/mL). Outro protocolo de cura utilizado foi repique de pontas de hifas em condicoes de cultura a 35oC, ao inves da cultura a 28oC, criando uma condicao de estresse termico para o fungo. Dos sete isolados investigados, apenas tres apresentaram crescimento nestas condicoes. Destes, dois isolados produziram onze setores que foram investigados quanto a presenca de RNAdf. Em nove nao foram observadas bandas de RNAdf apos eletroforese de gel de agarose. Neste momento, estes foram considerados curados do RNAdf. Para a transmissao, foi necessario selecionar isolados de G. citricarpa com caracteristicas que os diferenciassem, alem da presenca/ausencia de RNAdf. Isolados foram investigados quanto ao padrao de bandas de RAPD, porem, nao foi possivel diferencia-los. Optou-se por utilizar uma caracteristica morfologica, a presenca ou ausencia de halo amarelo em meio aveia. Os isolados com RNAdf sao positivos para esta caracteristica. Foram selecionados doze isolados de G. citricarpa sem RNAdf, negativos para esta caracteristica. Apos avaliar a compatibilidade destes isolados com um isolado com RNAdf, experimentos de transmissao foram conduzidos. 27 colonias que nao formaram halo em meio aveia, provenientes de conidios da area de contato entre os isolados, foram investigadas quanto a presenca de RNAdf e 7 delas (28,92%) receberam RNAdf. As linhagens isogenicas foram investigadas quanto a morfologia da colonia e foi possivel verificar que as linhagens com RNAdf apresentam um menor diametro da colonia apos 15 dias de cultura. Testes estatisticos comprovaram esta observacao. Com o objetivo de sequenciar o genoma deste virus, foi aperfeicoado o protocolo de obtencao de seu cDNA. Este foi obtido e nas proximas etapas desta pesquisa, devera ser sequenciado. Esta sequencia servira para completar a analise filogenetica de virus da familia Totiviridae realizada neste trabalho. Os respectivos fungos hospedeiros destes virus tambem foram enquadrados filogeneticamente por meio de sequencias da regiao ITS1-5,8S-ITS2. No entanto, a analise dessa regiao nao forneceu indicios de co-evolucao entre virus e hospedeiro.-
Formato: dc.formatapplication/pdf-
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Palavras-chave: dc.subjectTeses-
Título: dc.titleRNA dupla fita em Guignardia Citricarpa-
Tipo de arquivo: dc.typelivro digital-
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