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Metadados | Descrição | Idioma |
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Autor(es): dc.contributor | Pedrosa, Fabio O., 1947- | - |
Autor(es): dc.contributor | Benelli, Elaine Machado, 1970- | - |
Autor(es): dc.contributor | Universidade Federal do Paraná. Setor de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Ciências (Bioquímica) | - |
Autor(es): dc.creator | Couto, Gustavo Henrique | - |
Data de aceite: dc.date.accessioned | 2019-08-21T23:03:38Z | - |
Data de disponibilização: dc.date.available | 2019-08-21T23:03:38Z | - |
Data de envio: dc.date.issued | 2019-05-24 | - |
Data de envio: dc.date.issued | 2019-05-24 | - |
Data de envio: dc.date.issued | 2005 | - |
Fonte completa do material: dc.identifier | https://hdl.handle.net/1884/1964 | - |
Fonte: dc.identifier.uri | http://educapes.capes.gov.br/handle/1884/1964 | - |
Descrição: dc.description | Orientador : Fabio de Oliveira Pedrosa | - |
Descrição: dc.description | Co-orientadora : Elaine Machado Benelli | - |
Descrição: dc.description | Dissertaçao (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciencias Biológicas, Programa de Pós-Graduaçao em Bioquímica. Defesa: Curitiba, 2005 | - |
Descrição: dc.description | Inclui bibliografia | - |
Descrição: dc.description | Resumo: O Herbaspirillum seropedicae é um diazotrofo endofítico encontrado dentro de raízes, caules e folhas de diversas gramíneas de interesse agrícola. Essa bactéria é capaz de fixar nitrogênio atmosférico sob condições microaeróbicas e na ausência de amônio. Em H. seropedicae o sistema Ntr participa da regulação da expressão da proteína NifA, ativadora transcricional dos genes responsáveis pela fixação de nitrogênio atmosférico. A proteína GlnD possui um papel chave na regulação do sistema Ntr atuando como um sensor dos níveis de nitrogênio intracelular e controlando o estado de uridililação da proteína GlnB, uma das proteínas envolvidas na cascata de regulação da fixação de nitrogênio. O gene glnD foi amplificado a partir do DNA genômico do H. seropedicae utilizando oligonucleotídeos sintetizados. A seqüência do gene glnD de H. seropedicae foi obtida do Banco de Dados do Projeto de Sequenciamento Genômico do H. seropedicae - GENOPAR (Programa Genoma do Paraná). O fragmento amplificado foi clonado no vetor pGEM-T e subclonado nos vetores de expressão pET28b(+) e pET29a(+) originando os plasmídeos pGH1 e pGH2, capazes de superexpressar a proteína GlnD ligada a uma cauda N-terminal de histidinas (GlnD-His) e na sua forma nativa (GlnD), respectivamente. As condições de expressão das proteínas GlnD e GlnD-His na estirpe duplo-mutante glnB' e glnD' de E. coli RB9065(ÀDE3) foram otimizadas. Para aumentar a quantidade de proteína solúvel foi investigado o efeito de diferentes fatores na composição do tampão de lise das células. A proteína GlnD-His foi purificada por cromatografia de afinidade numa coluna de afinidade (HiTrap- Chelating-Ni+2) em uma única etapa. A proteína GlnD nativa foi parcialmente purificada por cromatografia de troca aniônica (DEAE-Sepharose) em um sistema de FPLC. | - |
Formato: dc.format | 99f. : il. algumas color. | - |
Formato: dc.format | application/pdf | - |
Formato: dc.format | application/pdf | - |
Relação: dc.relation | Disponível em formato digital | - |
Palavras-chave: dc.subject | Teses | - |
Palavras-chave: dc.subject | Bioquímica | - |
Palavras-chave: dc.subject | Proteínas | - |
Palavras-chave: dc.subject | Nitrogênio - Fixação | - |
Título: dc.title | Expressao e purificaçao da proteína GInD de Herbaspirillum seropedicae | - |
Tipo de arquivo: dc.type | livro digital | - |
Aparece nas coleções: | Repositório Institucional - Rede Paraná Acervo |
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