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Síntese do peptídeo Li1 e sua contribuição para a inibição da internalização de formas infectantes de Leishmania amazonensis em macrófagos: estudos in vitro e in vivo em modelo de leishmaniose cutânea

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MetadadosDescriçãoIdioma
Autor(es): dc.contributorGraminha, Márcia Aparecida Silva-
Autor(es): dc.contributorUniversidade Estadual Paulista (UNESP)-
Autor(es): dc.contributorCoelho, Natália Caroline Costa-
Autor(es): dc.creatorReis, Túlio Custódio-
Data de aceite: dc.date.accessioned2025-08-21T20:47:50Z-
Data de disponibilização: dc.date.available2025-08-21T20:47:50Z-
Data de envio: dc.date.issued2025-07-21-
Data de envio: dc.date.issued2025-06-24-
Fonte completa do material: dc.identifierhttps://hdl.handle.net/11449/312288-
Fonte: dc.identifier.urihttp://educapes.capes.gov.br/handle/11449/312288-
Descrição: dc.descriptionDe acordo com a Organização Mundial da Saúde (OMS) as leishmanioses são doenças tropicais negligenciadas (DTNs) que afetam populações vulneráveis em países em desenvolvimento. As formas infectantes de Leishmania, denominadas promastigotas metacíclicas, são transmitidas pelo vetor flebotomíneo durante o repasto sanguíneo. No trabalho de Verga et al. (2024), o peptídeo Li1 foi selecionado por phage display com base em sua afinidade por formas promastigotas metacíclicas de Leishmania infantum, tendo sua atividade avaliada em modelos de leishmaniose visceral, tanto in vitro quanto in vivo. Já no presente estudo, aprofundou-se a caracterização funcional do Li1, bem como de seu análogo linear Li1nc, no contexto da leishmaniose cutânea causada por L. amazonensis. Foram conduzidos dois modelos in vivo distintos: um de infecção profilática, no qual promastigotas metacíclicas foram previamente tratadas com os peptídeos antes da infecção em camundongos BALB/c, e outro de infecção terapêutica, com administração dos peptídeos após a infecção estar estabelecida. Essa abordagem permitiu explorar o potencial dos peptídeos em diferentes fases da infecção e em um modelo clínico distinto, ampliando a compreensão sobre sua especificidade e eficácia. Promastigotas após incubação com 0,5 mg/mL do peptídeo Li1 apresentaram redução da taxa de infecção para 58,5% em macrófagos murinos e 54% em macrófagos diferenciados de células THP-1, o peptídeo Li1nc reduziu a taxa de infecção para 76,8% em macrófagos murinos e 81,1% em macrófagos THP-1. Interessantemente, os peptídeos também influenciaram no índice de infecção, enquanto o controle para os macrófagos THP-1 apresentou índice de 30,3, os peptídeos Li1 e Li1nc apresentaram índice referente a 15,9 e 24, respectivamente. Para o modelo murino, o controle apresentou índice de 36,7, enquanto Li1 e Li1nc índice referente a 21,3 e 28,2. A interação dos peptídeos com a superfície celular de formas promastigotas procíclicas e metacíclicas foi caracterizada por ensaio de localização celular utilizando microscopia confocal. Adicionalmente, verificou-se que os peptídeos interagem com a superfície celular de ambos os modelos de macrófagos empregados. As moléculas também foram avaliadas em modelo de leishmaniose cutânea em camundongo BALB/c. Inicialmente, os peptídeos foram avaliados quanto a capacidade de redução da internalização das formas infectantesin vivo, para isso, formas metacíclicas foram incubadas previamente com 0,2 mg/mL dos peptídeos e posteriormente empregadas para a infecção em BALB/c. Após 30 dias a carga parasitária foi determinada em 44,8% para o Li1 e 68,9% para o peptídeo Li1nc, ambos reduzindo significativamente a infecção se comparado ao controle não tratado, adicionalmente, as análises bioquímicas não demonstraram danos hepáticos e renais para esses grupos. Em seguida, os peptídeos foram avaliados quanto a capacidade de redução da carga parasitária em infecção já estabelecida em BALB/c. Após 45 dias de infecção os animais foram tratados com 36 mg/Kg/dia dos peptídeos e 2 mg/Kg/dia de anfotericina B. Para esse experimento os peptídeos não foram efetivos, pois não apresentaram valores significativos para a carga parasitária se comparado ao controle não tratado, enquanto a anfotericina B reduziu a carga parasitária para 47,9%. Estes resultados evidenciam que os peptídeos Li1 e Li1nc, embora apresentem estruturas diferentes, ambos interagem com moléculas de superfície em L. amazonensis que são importantes para a internalização de formas metacíclicas in vitro e in vivo. Entretanto, Li1 apresenta maior interação e eficácia, sugerindo especificidade de ação. Além disso, o fato de Li1nc manter parte da atividade, mas significativamente inferior a Li1, reforça que a atividade está ligada não apenas à sequência de resíduos de aminoácidos da cadeia peptídica, mas à estrutura cíclica do peptídeo.-
Descrição: dc.descriptionSegún la Organización Mundial de la Salud (OMS), las leishmaniasis son enfermedades tropicales desatendidas (ETDs) que afectan a poblaciones vulnerables en países en desarrollo. Las formas infectantes de Leishmania, denominadas promastigotes metacíclicos, son transmitidas por el vector flebotomíneo durante la alimentación sanguínea. En el estudio de Verga et al. (2024), el péptido Li1 fue seleccionado mediante phage display en función de su afinidad por las formas metacíclicas de Leishmania infantum, y su actividad fue evaluada en modelos de leishmaniasis visceral, tanto in vitro como in vivo. En el presente estudio, se exploró más a fondo la caracterización funcional de Li1, junto con su análogo lineal Li1nc, en el contexto de la leishmaniasis cutánea causada por L. amazonensis. Se llevaron a cabo dos modelos in vivo distintos: un modelo de infección profiláctico, en el cual los promastigotes metacíclicos fueron pretratados con los péptidos antes de la infección en ratones BALB/c, y un modelo terapéutico, en el cual los péptidos fueron administrados una vez establecida la infección. Este enfoque permitió investigar el potencial de los péptidos en diferentes etapas de la infección y en un modelo clínico distinto, ampliando así la comprensión sobre su especificidad y eficacia. Los promastigotes incubados con 0,5 mg/mL del péptido Li1 mostraron una reducción en la tasa de infección al 58,5% en macrófagos murinos y al 54% en macrófagos derivados de células THP-1. El péptido Li1nc redujo la tasa de infección al 76,8% en macrófagos murinos y al 81,1% en macrófagos THP-1. De forma interesante, los péptidos también influyeron en el índice de infección: mientras que el control en macrófagos THP-1 mostró un índice de 30,3, los péptidos Li1 y Li1nc presentaron índices de 15,9 y 24, respectivamente. En el modelo murino, el control mostró un índice de 36,7, mientras que Li1 y Li1nc presentaron índices de 21,3 y 28,2. La interacción de los péptidos con la superficie celular de las formas promastigotas procíclicas y metacíclicas fue caracterizada mediante un ensayo de localización celular utilizando microscopía confocal. Además, se observó que los péptidos interactúan con la superficie celular de ambos modelos de macrófagos utilizados. Los péptidos fueron evaluados en un modelo de leishmaniasis cutánea en ratones BALB/c. Inicialmente, se evaluó la capacidad de los péptidos para reducir la internalización de las formas infectantes in vivo. Para ello, los promastigotes metacíclicos fueron previamente incubados con 0,2 mg/mL de los péptidos y luego utilizados para la infección en BALB/c. Tras 30 días, la carga parasitaria fue de 44,8% para Li1 y de 68,9% para Li1nc, ambas reducciones significativas en comparación con el control no tratado. Además, los análisis bioquímicos no evidenciaron daño hepático ni renal en estos grupos. Posteriormente, los péptidos fueron evaluados por su capacidad para reducir la carga parasitaria en una infección ya establecida en BALB/c. Después de 45 días de infección, los animales fueron tratados con 36 mg/kg/día de los péptidos y con 2 mg/kg/día de anfotericina B. En este experimento, los péptidos no fueron efectivos, ya que no mostraron reducciones significativas en la carga parasitaria en comparación con el control no tratado, mientras que la anfotericina B redujo la carga parasitaria al 47,9%. Estos resultados demuestran que los péptidos Li1 y Li1nc, a pesar de tener estructuras distintas, interactúan con moléculas de superficie de L. amazonensis que son importantes para la internalización de las formas metacíclicas, tanto in vitro como in vivo. Sin embargo, Li1 presenta una mayor interacción y eficacia, lo que sugiere una especificidad de acción. Además, el hecho de que Li1nc conserve una actividad parcial —aunque significativamente menor que Li1— respalda aún más que dicha actividad está relacionada no solo con la secuencia de aminoácidos de la cadena peptídica, sino también con la estructura cíclica del péptido.-
Descrição: dc.descriptionAccording to the World Health Organization (WHO), leishmaniases are neglected tropical diseases (NTDs) that affect vulnerable populations in developing countries. The infective forms of Leishmania, called metacyclic promastigotes, are transmitted by the phlebotomine vector during the blood meal. In the study by Verga et al. (2024), the Li1 peptide was selected by phage display based on its affinity for metacyclic promastigote forms of Leishmania infantum, and its activity was evaluated in visceral leishmaniasis models, both in vitro and in vivo. In the present study, the functional characterization of Li1 was further explored, along with its linear analogue Li1nc, in the context of cutaneous leishmaniasis caused by L. amazonensis. Two distinct in vivo models were conducted: a prophylactic infection model, in which metacyclic promastigotes were pre-treated with the peptides prior to infection in BALB/c mice, and a therapeutic infection model, in which the peptides were administered after infection was established. This approach allowed for the investigation of the peptides' potential at different stages of infection and in a distinct clinical model, thereby expanding the understanding of their specificity and efficacy. Promastigotes after incubation with 0.5 mg/mL of peptide Li1 showed a reduction in the infection rate to 58.5% in murine macrophages and 54% in THP-1 cellderived macrophages, the Li1nc peptide reduced the infection rate to 76.8% in murine macrophages and 81.1% in THP-1 macrophages. Interestingly, the peptides also influenced the infection index, while the control for THP-1 macrophages showed an index of 30.3, peptides Li1 and Li1nc showed indices of 15.9 and 24, respectively. For the murine model, the control showed an index of 36.7, while Li1 and Li1nc showed indices of 21.3 and 28.2. The interaction of the peptides with the cell surface of procyclic and metacyclic promastigote forms was characterized by a cell localization assay using confocal microscopy. Additionally, it was found that the peptides interact with the cell surface of both macrophage models used. The peptides were evaluated in a cutaneous leishmaniasis model in BALB/c mice. Initially, the peptides were evaluated for their ability to reduce the internalization of infective forms in vivo, for this, metacyclic promastigotes were previously incubated with 0.2 mg/mL of the peptides and later used for infection in BALB/c. After 30 days, the parasitic load was determined at 44.8% for Li1 and 68.9% for peptide Li1nc, both significantly reducing the infection compared to the untreated control, additionally, biochemical analyses did not show hepatic or renal damage for these groups. Next, the peptides were evaluated for their ability to reduce the parasitic load in already established infection in BALB/c. After 45 days of infection, the animals were treated with 36 mg/kg/day of the peptides and 2 mg/kg/day of amphotericin B. For this experiment, the peptides were not effective, as they did not show significant values for the parasitic load compared to the untreated control, while amphotericin B reduced the parasitic load to 47.9%. These results demonstrate that peptides Li1 and Li1nc, despite having different structures, both interact with surface molecules of L. amazonensis that are important for the internalization of metacyclic promastigote forms in vitro and in vivo. However, Li1 exhibits greater interaction and efficacy, suggesting specificity of action. Moreover, the fact that Li1nc retains partial activity, albeit significantly lower than that of Li1, further supports that the activity is related not only to the amino acid sequence of the peptide chain but also to the cyclic structure of the peptide.-
Descrição: dc.descriptionCoordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)-
Descrição: dc.descriptionFundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)-
Descrição: dc.descriptionFinanciadora de Estudos e Projetos (FINEP)-
Descrição: dc.descriptionCAPES: 8887.820473/2023-00-
Descrição: dc.descriptionFAPESP: 2020/0445-4-
Descrição: dc.descriptionFINEP: 01.23.0034.00 (0419/22)-
Formato: dc.formatapplication/pdf-
Formato: dc.formatapplication/pdf-
Idioma: dc.languagept_BR-
Publicador: dc.publisherUniversidade Estadual Paulista (UNESP)-
Direitos: dc.rightsinfo:eu-repo/semantics/restrictedAccess-
Palavras-chave: dc.subjectRelação hospedeiro-parasito-
Palavras-chave: dc.subjectLeishmania-
Palavras-chave: dc.subjectPeptídeos-
Palavras-chave: dc.subjectL. amazonensis-
Palavras-chave: dc.subjectPeptídeos sintéticos-
Palavras-chave: dc.subjectInteração parasito-hospedeiro-
Palavras-chave: dc.subjectParasite-host interaction-
Palavras-chave: dc.subjectSynthetic peptides-
Título: dc.titleSíntese do peptídeo Li1 e sua contribuição para a inibição da internalização de formas infectantes de Leishmania amazonensis em macrófagos: estudos in vitro e in vivo em modelo de leishmaniose cutânea-
Título: dc.titleSíntesis del péptido Li1 y su contribución a la inhibición de la internalización de formas infectantes de Leishmania amazonensis en macrófagos: estudios in vitro e in vivo en un modelo de leishmaniasis cutánea.-
Tipo de arquivo: dc.typelivro digital-
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