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Avaliação da metodologia de reação do p-nitrofenilbutirato na detecção da atividade enzimática da cutinase
Use este link compartilhar ou citar este material: http://educapes.capes.gov.br/handle/11449/251859
Registro completo de metadados
| Metadados | Descrição | Idioma |
|---|---|---|
| Autor(es): dc.contributor | Angelis, Derlene Attili de | - |
| Autor(es): dc.contributor | Bucioli, Elaine Cristina | - |
| Autor(es): dc.creator | Miranda, Samara Pereira | - |
| Data de aceite: dc.date.accessioned | 2025-08-21T20:02:29Z | - |
| Data de disponibilização: dc.date.available | 2025-08-21T20:02:29Z | - |
| Data de envio: dc.date.issued | 2023-12-11 | - |
| Data de envio: dc.date.issued | 2023-12-11 | - |
| Data de envio: dc.date.issued | 2023-11-07 | - |
| Fonte completa do material: dc.identifier | https://hdl.handle.net/11449/251859 | - |
| Fonte: dc.identifier.uri | http://educapes.capes.gov.br/handle/11449/251859 | - |
| Descrição: dc.description | Há uma preocupante exploração dos recursos naturais não renováveis, que ameaça a demanda de uma população global em crescimento. Polímeros sintéticos possuem versatilidade, baixo custo, maleabilidade, durabilidade e resistência, por isso são considerados muito importantes economicamente. Por outro lado, representam um grande problema ambiental em função de sua lenta degradação, a qual pode levar séculos. A biodegradação de um substrato é favorecida pela ação de enzimas microbianas, as quais têm se revelado como uma das alternativas mais interessantes para a recuperação de diversos tipos de plásticos. Pode ocorrer em condições aeróbicas, anaeróbicas ou em uma combinação sinérgica de ambas, levando a diferentes graus de fragilização, fragmentação e solubilização do material. Assim, tecnologias de biorremediação que empregam esses catalisadores surgiram como uma solução viável para o reuso ou recuperação de diferentes materiais, a fim de minimizar o problema. Dentre tantas enzimas já identificadas para este fim, a cutinase é investigada por sua capacidade de degradar a cutina, um poliéster alifático que atua como barreira de proteção natural de muitas plantas. Sua ação biocatalisadora, contudo, se estende a vários poliésteres artificiais, alguns tóxicos, inclusive. Uma das metodologias indicadas para detecção da atividade dessa enzima é a reação do p-nitrofenilbutirato (pNPB), que apesar de utilizada em vários estudos, ainda apresenta alguns desafios em sua aplicação. Assim, apoiando um projeto de pesquisa que investiga a produção de cutinases microbianas para uso na despolimerização do Polietilenotereftalato – PET, foi avaliado o método espectrofotométrico de hidrólise do p-nitrofenilbutirato cuja mistura reacional costuma ser instável para determinação da atividade enzimática da cutinase. A atividade da cutinase foi determinada pelo método espectrofotométrico a 405 nm. A reação foi monitorada por 15 minutos e comparada com a solução controle. A interrupção da reação foi avaliada pela adição de fluoreto de fenilmetilsulfonila (PMSF) ao meio reacional de determinação da atividade enzimática e após isso foi feita uma análise estatística dos dados consistiu no teste não paramétrico de Kruskal-Wallis. Esse ensaio de inibição da atividade cutinolítica foi otimizado e validado com sucesso. Apresentou alta reprodutibilidade e confiabilidade, de acordo com os resultados obtidos com a presença do inibidor e com a temperatura a 40ºC em 15 minutos de incubação, podendo ser utilizado preliminarmente para a aplicação da mesma em outros projetos, que visem a detecção da produção de cutinase microbiana. | - |
| Descrição: dc.description | There is a worrying exploitation of non-renewable natural resources, which threatens the demand of a growing global population. Synthetic polymers have versatility, low cost, malleability, durability and resistance, which is why they are considered very important economically. On the other hand, they represent a major environmental problem due to their slow degradation, which can take centuries. The biodegradation of a substrate is favored by the action of microbial enzymes, which have proven to be one of the most interesting alternatives for the recovery of different types of plastics. It can occur under aerobic, anaerobic or a synergistic combination of both conditions, leading to different degrees of embrittlement, fragmentation and solubilization of the material. Thus, bioremediation technologies that employ these catalysts have emerged as a viable solution for the reuse or recovery of different materials in order to minimize the problem. Among the many enzymes already identified for this purpose, cutinase is investigated for its ability to degrade cutin, an aliphatic polyester that acts as a natural protection barrier for many plants. Its biocatalyst action, however, extends to several artificial polyesters, some of which are even toxic. One of the methodologies recommended for detecting the activity of this enzyme is the p-nitrophenylbutyrate (pNPB) reaction, which, despite being used in several studies, still presents some challenges in its application. Thus, supporting a research project that investigates the production of microbial cutinases for use in the depolymerization of Polyethylene terephthalate – PET, the spectrophotometric method of hydrolysis of p-nitrophenylbutyrate, whose reaction mixture is usually unstable, was evaluated to determine the enzymatic activity of the cutinase. Cutinase activity was determined by the spectrophotometric method at 405 nm. The reaction was monitored for 15 minutes and compared with the control solution. The interruption of the reaction was evaluated by the addition of phenylmethylsulfonyl fluoride (PMSF) to the reaction medium to determine the enzymatic activity and after that a statistical analysis of the data was carried out consisting of the non-parametric Kruskal-Wallis test. This cutinolytic activity inhibition assay was successfully optimized and validated. It showed high reproducibility and reliability, according to the results obtained with the presence of the inhibitor and the temperature at 40ºC in 15 minutes of incubation. Besides, it can be used preliminarily for its application in other projects, aimed at detecting the production of microbial cutinase. | - |
| Descrição: dc.description | Não recebi financiamento | - |
| Formato: dc.format | application/pdf | - |
| Idioma: dc.language | pt_BR | - |
| Publicador: dc.publisher | Universidade Estadual Paulista (UNESP) | - |
| Direitos: dc.rights | info:eu-repo/semantics/openAccess | - |
| Palavras-chave: dc.subject | Espectrofotometria | - |
| Palavras-chave: dc.subject | Hidrólise | - |
| Palavras-chave: dc.subject | Enzimas microbianas | - |
| Palavras-chave: dc.subject | Indústria, inovação e infraestrutura | - |
| Palavras-chave: dc.subject | Spectrophotometry | - |
| Palavras-chave: dc.subject | Hydrolysis | - |
| Palavras-chave: dc.subject | Microbial Enzymes | - |
| Palavras-chave: dc.subject | Industry, innovation and infrastructure | - |
| Título: dc.title | Avaliação da metodologia de reação do p-nitrofenilbutirato na detecção da atividade enzimática da cutinase | - |
| Título: dc.title | Evaluation of the p-nitrophenylbutyrate reaction methodology in detecting cutinase enzymatic activity | - |
| Tipo de arquivo: dc.type | livro digital | - |
| Aparece nas coleções: | Repositório Institucional - Unesp | |
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