Ligand screening assay for the enzyme kallikrein immobilized on NHS-activated Sepharose

Registro completo de metadados
MetadadosDescriçãoIdioma
Autor(es): dc.contributorUniversidade de São Paulo (USP)-
Autor(es): dc.contributorUniversidade Estadual Paulista (Unesp)-
Autor(es): dc.creatorCarvalho, Daniella Romano de-
Autor(es): dc.creatorXimenes, Valdecir Farias [UNESP]-
Autor(es): dc.creatorGroppo, Milton-
Autor(es): dc.creatorCardoso, Carmen Lucia-
Data de aceite: dc.date.accessioned2022-02-22T00:59:22Z-
Data de disponibilização: dc.date.available2022-02-22T00:59:22Z-
Data de envio: dc.date.issued2021-06-25-
Data de envio: dc.date.issued2021-06-25-
Data de envio: dc.date.issued2021-05-30-
Fonte completa do material: dc.identifierhttp://dx.doi.org/10.1016/j.jpba.2021.114026-
Fonte completa do material: dc.identifierhttp://hdl.handle.net/11449/210276-
Fonte: dc.identifier.urihttp://educapes.capes.gov.br/handle/11449/210276-
Descrição: dc.descriptionHuman tissue kallikreins (KLKs) are serine proteases involved in various physiological and pathological conditions, including cancer and neurological disorders. These enzymes constitute attractive drug targets, which has stimulated the search for new KLK inhibitors. In this study, we have covalently immobilized porcine pancreas KLK on an NHS-activated Sepharose matrix, to obtain KLK-Sepharose-NHS. The immobilized enzyme showed high recovered activity and maintained the ability of free KLK to recognize the synthetic substrate Z-Phe-Arg-AMC (K-Mapp = 10.3 +/- 0.9 mu M). As proof of concept, we used leupeptin as a reference inhibitor to perform inhibition studies for KLK-Sepharose-NHS and to determine the halfmaximal inhibitory concentration (IC50 = 0.13 +/- 0.01 mu M), the inhibition constant (K-i = 0.06 mu M), and the leupeptin inhibition mechanism. We evaluated several complex matrixes (plant crude extract) by the same bioassay, to demonstrate their applicability. The species Solanum lycocarpum, Stryphnodendron adstringens, and Psychotria carthagenensis gave the best results. KLK-Sepharose-NHS was fully active after six consecutive reaction cycles and retained about 60 % of its initial activity after being used for at least five months, so the bioassay developed herein is a promising strategy to screen and to identify KLK ligands. (C) 2021 Elsevier B.V. All rights reserved.-
Descrição: dc.descriptionFundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)-
Descrição: dc.descriptionConselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)-
Descrição: dc.descriptionCoordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)-
Descrição: dc.descriptionUniv Sao Paulo, Fac Filosofia Ciencias & Letras Ribeirao Preto, Dept Quim, Grp Cromatog Bioafinidade & Prod Nat, BR-14040901 Ribeirao Preto, SP, Brazil-
Descrição: dc.descriptionUniv Estadual Paulista, Fac Ciencias, Dept Quim, BR-17033360 Bauru, SP, Brazil-
Descrição: dc.descriptionUniv Sao Paulo, Fac Filosofia Ciencias & Letras Ribeirao Preto, Dept Biol, BR-14040901 Ribeirao Preto, SP, Brazil-
Descrição: dc.descriptionUniv Estadual Paulista, Fac Ciencias, Dept Quim, BR-17033360 Bauru, SP, Brazil-
Descrição: dc.descriptionFAPESP: 2019/05363-0-
Descrição: dc.descriptionFAPESP: 2014/50249-8-
Descrição: dc.descriptionFAPESP: 2016/06260-2-
Descrição: dc.descriptionCNPq: 141748/2017-6-
Descrição: dc.descriptionCNPq: 303723/2018-1-
Descrição: dc.descriptionCNPq: 311969/2019-4-
Descrição: dc.descriptionCAPES: 001-
Formato: dc.format7-
Idioma: dc.languageen-
Publicador: dc.publisherElsevier B.V.-
Relação: dc.relationJournal Of Pharmaceutical And Biomedical Analysis-
???dc.source???: dc.sourceWeb of Science-
Palavras-chave: dc.subjectKallikrein-
Palavras-chave: dc.subjectImmobilized enzyme-
Palavras-chave: dc.subjectLigand screening-
Título: dc.titleLigand screening assay for the enzyme kallikrein immobilized on NHS-activated Sepharose-
Tipo de arquivo: dc.typelivro digital-
Aparece nas coleções:Repositório Institucional - Unesp

Não existem arquivos associados a este item.