PADRONIZAÇÃO DE UM PROTOCOLO DE PCR-RFLP PARA A DETECÇÃO DO ALELO HLA*B-58:01 PARA UTILIZAÇÃO EM PACIENTES SUBMETIDOS AO TRATAMENTO COM ALOPURINOL

Abstract

A imunogenética baseia-se no estudo de genes denominados imunorrelevantes, devido sua influência na homeostasia do organismo, onde genes de antígenos leucocitários humanos (HLA: Human Leucocytary Antigens) ocupam uma posição de destaque. Durante anos foram descritas inúmeras associações entre antígenos HLA e reações adversas a alguns medicamentos, como é o caso do HLA-B*58:01 diretamente ligado a reações graves em pacientes que utilizam Alopurinol. O Alopurinol inibe a hipoxantina e reduz de forma eficaz a síntese de urato, o que o coloca na base do tratamento da gota e outras patologias, porém, esporadicamente induz reações graves como a Síndrome de Stevens-Johnson (SSJ) e Necrose Epidérmica Tóxica (NET), onde a taxa de mortalidade para NET é bem elevada chegando a 50% dos casos e 5% para a SSJ. Indivíduos portadores do HLA-B*58:01 possuem um risco 97 vezes maior de desenvolver um dos quadros clínicos induzidos pelo Alopurinol, do que em indivíduos que não possuem esse alelo. Estudos sugerem uma grande demanda para pesquisa de HLA-B*58:01 como biomarcador de hipersensibilidade ao Alopurinol. A farmacovigilância é definida como uma ciência que tem por objetivo promover a redução das taxas de morbidade e mortalidade, através da detecção precoce de problemas associados ao uso de medicamentos. Diante disso a técnica de PCR-RFLP torna-se uma alternativa atraente, na busca de um teste rápido, sensível e de baixo custo, tendo como objetivo principal, padronizar um protocolo de PCR-RFLP para identificar o HLA*B-58:01. O único método na literatura para tipagem de HLA-B*58:01 que preenche os pré-requisitos descritos é baseado em análise de tag-SNP, que consiste em usar polimorfismos em absoluta ligação com o alelo HLA-B*58:01 que é o SNP rs9263726 (MAKAWA et. al., 2012; VIDAL et. al,2015). Após a padronização do método, 37 amostras da população de Belém foram tipadas através da detecção indireta por SNP rs9263726, observando 7 indivíduos positivos heterozigotos para o SNP, obtendo frequência de 9,45% do total de amostras testadas, o resultado está em equilíbrio de Hardy-Weinberg e dentro do intervalo de variância estabelecido. Com isso a frequência encontrada foi superior à média das frequências continentais e mundial, como relatado em outras populações, no entanto, apresentou-se dentro do intervalo de variância alélica, confirmando o resultado dos testes.